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O que se entende por isolados clonais?


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o que significa o termo isolados clonais?


Freqüentemente, genes ou outros fragmentos de DNA são inseridos em um vetor de expressão e usados ​​para transformar bactérias ou outras células. Quando uma mistura de vetores é usada contendo vários fragmentos de DNA (por exemplo, um genoma cortado), então individual (bacteriana) colônias precisa ser isolado para certificar-se de que carregam apenas uma inserção. Isto pode ser feito, por exemplo, por plaqueamento da cultura de células transformadas de modo que colônias individuais sejam obtidas. Teoricamente, uma colônia representa a descendência de uma célula, portanto, a colônia como um todo tem uma inserção de DNA e é um isolado clonal.


O que é seleção clonal?

Linfócitos B e Linfócitos T helper tem único e específico receptores de antígeno em suas membranas de superfície celular. Cada célula terá um tipo ligeiramente diferente de receptor de antígeno. Essas células irão interagir com o patógeno células apresentadoras de antígeno, como o patógeno iteslf, macrófagos (que ingeriram um patógeno e apresentam os antígenos patogênicos em sua própria membrana da superfície celular) ou células humanas infectadas, para ver se seus receptores de antígenos correspondem aos antígenos. Assim que uma correspondência for encontrada, a célula que tem o receptor de antígeno correto sofrerá expansão clonal, onde a célula fará milhões de cópias de si mesma por meio de mitose.

O princípio é importante porque os linfócitos B eventualmente diferenciar e continue criando anticorpos que visam os antígenos específicos nos patógenos e os destroem para combater a infecção. Grandes quantidades de energia e recursos seriam desperdiçados criando anticorpos que não se encaixam nos antígenos do patógeno se linfócitos T ou B sem o receptor de antígeno correspondente fossem escolhidos para se replicar / passar por expansão clonal.


Ervas marinhas

4. Diversidade genética de ervas marinhas

As ervas marinhas são organismos clonais, portanto, a diversidade genética presente nos prados pode ser baixa. Na verdade, a reprodução vegetativa é de longe o modo dominante de propagação das ervas marinhas, portanto, a hipótese de que prados inteiros podem ser compostos de um ou alguns organismos não pode ser rejeitada sem consideração séria. Alguns aspectos da biologia das ervas marinhas, como a ocorrência de mortalidade em massa em grandes escalas espaciais, foram atribuídos ao domínio da reprodução vegetativa nas ervas marinhas e a uma suposta diversidade genética baixa para resistir a doenças. No entanto, os exames de diversidade genética de ervas marinhas ainda são poucos e estão bem atrás dos estudos de diversidade genética em outros grupos de angiospermas.

A introdução em meados da década de 1990 de técnicas moleculares para quantificar a extensão da diversidade genética das populações de ervas marinhas está agora fornecendo as informações necessárias para testar a suposta baixa diversidade genética dos prados. O exame da estrutura genética das populações de ervas marinhas mostrou uma variabilidade considerável na extensão da diversidade genética dentro e entre as espécies. A diversidade genética pode ser importante em algumas das espécies investigadas (por exemplo, Posidonia australis, T. testudinum, Halodule uninervis, e Z. marina), enquanto níveis muito baixos de variabilidade genética foram demonstrados para outras espécies (por exemplo, Anfibolis antártica e Posidonia oceanica) Mesmo nas espécies geneticamente variáveis, a maior parte da variação é encontrada dentro das populações locais, e há fluxo gênico reduzido em escalas de apenas alguns quilômetros ou mesmo metros ao longo dos gradientes de profundidade.

O nível de uniformidade genética das ervas marinhas parece ser maior do que o típico das plantas terrestres, apoiando a ideia de que os baixos níveis de especiação nas ervas marinhas podem derivar de uma reprodução sexual ineficiente. A variabilidade significativa dentro do prado em algumas espécies falsifica a suposição de que as ervas marinhas são primariamente clonais e desafia a explicação da alta clonalidade como o fator responsável pelo declínio em grande escala em Z. marina, cujas populações apresentam considerável variabilidade genética. Em contraste, o declínio generalizado de P. oceanica no Mediterrâneo pode ser associada à sua alta clonalidade. Embora alguma variação genética tenha sido relatada para populações ao longo de gradientes de profundidade, uma variação considerável só foi encontrada perto P. oceanica & # x27s limite biogeográfico na zona de transição Mediterrâneo-Atlântico. Na verdade, uma erva marinha (Z. marina) clone crescendo no Báltico foi identificado como o maior e mais antigo organismo marinho encontrado até hoje (Reusch et al., 1999). Os resultados até o momento não fornecem padrões de possíveis fatores regulatórios na diversidade genética das ervas marinhas porque as diferenças observadas entre as espécies não parecem corresponder às diferenças no modo reprodutivo ou nas propriedades de dispersão. O estudo da estrutura genética da população de ervas marinhas é uma área ativa de pesquisa, portanto, conclusões mais robustas do que as atualmente disponíveis devem ser obtidas em um futuro próximo.


Explicação da teoria de seleção clonal da produção de anticorpos

A teoria da seleção clonal é uma hipótese que afirma que os linfócitos de células B individuais expressam um receptor que é específico para o antígeno. Isso seria determinado antes que o anticorpo encontrasse o antígeno. A ativação ocorre dentro dos gânglios linfáticos, baço ou órgãos linfoides semelhantes, o que incentiva a clonagem, de modo que cada célula individual seja capaz de atingir um antígeno individual com eficácia.

Ele pode ser resumido por meio desses quatro pontos-chave.

  1. Cada linfócito oferece um único receptor que possui uma especificidade única individualizada.
  2. Para que a ativação celular ocorra, é necessária a ocupação do receptor.
  3. Cada célula efetora diferenciada que foi derivada de um linfócito que foi ativado carregará um receptor que é idêntico em especificidade a sua célula-mãe.
  4. Os linfócitos que carregam receptores para moléculas próprias serão deletados, principalmente em um estágio inicial.

Esta teoria do produto de anticorpo foi proposta pela primeira vez em 1957 pelo Dr. Frank Burnet, um médico australiano que estava tentando explicar como uma gama diversa de anticorpos era capaz de ser produzida durante uma resposta imune. A evidência experimental dessa teoria veio apenas um ano depois, quando Joshua Lederberg e Gustav Nossal conseguiram mostrar que uma célula B sempre produz um único anticorpo.

História da Teoria da Seleção Clonal

Paul Ehrlich é creditado por propor uma teoria da cadeia lateral da produção de anticorpos, que essencialmente afirmava que certos anticorpos ligados à membrana eram capazes de reagir a diferentes antígenos. O antígeno se ligaria à "cadeia lateral" correspondente, que criaria a duplicação de modo que todo o antígeno pudesse ser removido por todo o corpo.

Embora se revelasse um tanto impreciso, quando foi proposto pela primeira vez em 1900, estava muito mais próximo do que as evidências demonstrariam ser verdadeiras do que outras teorias sobre imunologia da época.

Então, em 1955, Niels Jerne ofereceu a ideia de que os anticorpos solúveis estão realmente presentes antes que qualquer infecção realmente ocorra. Este imunologista dinamarquês sugeriu que o corpo selecionaria o tipo correto de anticorpo em resposta ao antígeno.

Burnet essencialmente combinou essas duas idéias para formular sua hipótese, que seria apoiada por evidências empíricas.

Quem é Sir Frank Macfarlane Burnet?

Nascido em setembro de 1899, Frank Burnet era filho de um emigrante escocês na Austrália. Devido à sua estrutura familiar, muitas vezes ele se via sozinho quando criança, então suas atividades eram frequentemente de natureza "livresca". Isso levou a uma ênfase no estudo que o beneficiaria mais tarde na vida.

O Dr. Burnet ganharia o Prêmio Nobel em 1965 por predizer a tolerância imunológica adquirida. Seu desenvolvimento da teoria da seleção clonal é seu trabalho mais conhecido.

Ele obteve seu Doutorado em Medicina em 1924 pela University of Melbourne e, em seguida, seu PhD pela University of London em 1928. Muito de seu trabalho, incluindo o desenvolvimento da teoria de seleção clonal de produção de anticorpos, ocorreu no Walter and Eliza Hall Instituto de Pesquisa Médica localizado em Melboure. Burnet atuou como diretor do instituto de 1944-1965.

Burnet continuaria a trabalhar na Universidade de Melbourne após sua aposentadoria em 1965 e permaneceu ativo em seu campo de estudo. Ele foi um membro fundador da Australian Academy of Science e até serviu como seu presidente de 1965-1969.

Em 1978, Burnet foi nomeado Cavaleiro da Ordem da Austrália e recebeu vários doutorados honorários, o Prêmio Lasker, a Medalha Real e a Medalha Copley, além do Prêmio Nobel.

Quais são os resultados da teoria da seleção clonal?

Por causa da teoria da seleção clonal, o Dr. Burnet foi capaz de propor que os tecidos poderiam ser transplantados com sucesso em um receptor estrangeiro. Isso trouxe vários avanços nas áreas de transplante de tecidos e órgãos, juntamente com uma compreensão ainda mais profunda do que o sistema imunológico é capaz de fazer.

A teoria da rede imunológica também se baseia na teoria da seleção clonal, outra hipótese que ganharia o Prêmio Nobel em 1984. Proposta por Niels Kaj Jerne, que propõe que o sistema imunológico funcione no estilo de uma rede. Partes variáveis ​​dos linfócitos e suas moléculas seriam reguladas pela forma como interagem entre si.

Muito do entendimento que temos hoje em relação ao sistema imunológico vem do trabalho e das propostas de Frank Burnet. A teoria da seleção clonal da produção de anticorpos tornou-se a base da imunologia e da medicina moderna, permitindo-nos ser capazes de tratar melhor os problemas de saúde devido ao entendimento que ela proporcionou.


O que é seleção clonal? (com foto)

A seleção clonal é um importante processo imunológico que determina quais linfócitos B e T, tipos de glóbulos brancos, serão produzidos em grandes quantidades. É por meio desse processo que nosso corpo combate os antígenos - substâncias que ele considera prejudiciais a ele. Niels Jerne, um imunologista dinamarquês, forneceu a base para a teoria da seleção clonal em 1955. Antes da teoria de Jerne, era uma crença comum que nossos corpos eram estimulados a produzir um anticorpo específico quando uma substância estranha entrava nele.

Jerne propôs que os humanos nascem com os modelos necessários para todos os anticorpos que o sistema imunológico precisaria produzir. Todo o repertório imunológico de anticorpos de cada pessoa é desenvolvido ainda no útero. David Talmage e F. McFarlane Burnet delinearam independentemente o processo de seleção clonal em 1957.

Cada linfócito possui um anticorpo único em sua superfície. Os anticorpos são proteínas que se ligam a antígenos prejudiciais para neutralizá-los. Se as células imaturas têm receptores de antígenos que correspondem aos tecidos do próprio corpo, essas células em particular são destruídas.

A seleção clonal é parte da resposta imune primária. Uma resposta imune primária é provocada quando um novo antígeno invade o corpo. Viajando pelo sistema circulatório, o antígeno inevitavelmente se encontrará com o linfócito que tem o padrão correto de anticorpos.

Quando o linfócito e o antígeno se conectam, uma mudança química é desencadeada. O linfócito é ativado, fazendo com que se multiplique rapidamente e crie muitos clones de si mesmo. É assim que o processo passou a ser chamado de seleção clonal. O corpo continuará produzindo grandes quantidades de células linfocitárias selecionadas em um esforço para inibir e prevenir infecções.

Enquanto se multiplica, o linfócito cria dois tipos principais de células: células efetoras e células de memória. As células efetoras, ou linfócitos B e T, são células de vida curta criadas para defesa imunológica imediata. As células de memória não estão ativas durante a resposta imune primária, mas desempenharão um papel importante durante a resposta imune secundária.

As células efetoras são células que são produzidas para desempenhar uma função específica em resposta a um determinado estímulo. Nesse caso, as células são produzidas em resposta a um antígeno específico. As células B efetoras são responsáveis ​​pela produção de anticorpos.

As células T são divididas em células T auxiliares e células citotóxicas. As células auxiliares produzem citocinas. As citocinas são moléculas de proteína que são produzidas quando um antígeno é detectado para ajudar na comunicação célula a célula e na resposta imunológica. As células T citotóxicas destroem as células que foram infectadas com o antígeno em questão.

Algumas das células B e T criadas se tornarão células de memória. Na segunda vez que um antígeno entra no corpo, ele dispara uma resposta imunológica secundária. As células de memória criadas durante a seleção clonal reativam e montam uma resposta. Cada vez que um sistema imunológico é exposto a um antígeno, o número de células de memória criadas torna-se cada vez maior, reduzindo assim os efeitos de um antígeno.


Cepas vs. isolados - diferença? (19 / jun / 2010)

Estou tentando escrever meu artigo envolvendo um estudo em que organismos foram genotipados. Eu continuo alternando entre usar as palavras "cepas" e "isolados", e meu supervisor diz que há diferenças entre elas. Principalmente, as cepas são isolados que foram caracterizados, enquanto os isolados não.

Essa é uma definição correta e há algo adicional sobre as diferenças?

Muito obrigado por sua ajuda & # 33

Diferentes isolados podem ser a mesma cepa, mas diferentes cepas não podem ser o mesmo isolado.

O HomeBrew em 19 de junho de 2010, 02 e # 5818 PM disse:

ah entendi, curto, conciso e claro. Obrigado

ah, então, se um projeto envolve genotipagem, mas anterior eu não conheço nenhuma informação sobre a "cepa", em materiais e métodos eu teria que dizer isolar, e não é até a seção de resultados que eu os indico às cepas, certo?

O PandaCreamPuff em 19 de junho de 2010, 06 e # 5812 PM disse:

O HomeBrew em 19 de junho de 2010, 02 e # 5818 PM disse:

ah entendi, curto, conciso e claro. Obrigado

ah, então, se um projeto envolve genotipagem, mas não conheço nenhuma informação anterior sobre a "cepa", em materiais e métodos, eu teria que dizer isolar, e não é até a seção de resultados que os indico às cepas, certo?

Se você tiver um isolado, pode "investigar" esse isolado e colocar um nome (= cepa) nele.

Um isolado é apenas algo que você "isolou" de um animal ou de um animal. e então você deseja classificar esses isolados: nomeie-os, descubra que cepa é.
Foi assim que me disseram.


PS. se eu entendi correto, então colocar um nome em seus isolados é exatamente o que você está tentando fazer. então sim, a tensão (identificação) é o seu resultado.

mas você pode adicionar algumas informações sobre o gênero / espécie / cepa quando já sabia o que estava procurando. Como quando você tentou isolar Lactobaccillus, você pode se referir às condições gerais de crescimento ou a uma característica fisiológica típica deste gênero que foi usada para excluir outros táxons.


Resumo

  1. Cada célula B ingênua torna-se geneticamente programada para produzir um anticorpo com um único sítio de ligação ao antígeno (Fab) por meio de uma série de translocações gênicas, e moléculas desse anticorpo são colocadas em sua superfície para funcionar como o receptor da célula B.
  2. Quando um antígeno encontra o sistema imunológico, seus epítopos eventualmente irão reagir apenas com linfócitos B com receptores de células B em sua superfície que mais ou menos se adaptam e isso ativa esses linfócitos B. Este processo é conhecido como seleção clonal.
  3. As citocinas produzidas por linfócitos T4 auxiliares ativados permitem que esses linfócitos B ativados proliferem rapidamente para produzir grandes clones de milhares de linfócitos B idênticos.
  4. Desta forma, embora apenas alguns linfócitos B no corpo possam ter uma molécula de anticorpo capaz de se ajustar a um determinado epítopo, eventualmente muitos milhares de células são produzidas com a especificidade correta. Isso é conhecido como expansão clonal.

O que é seleção clonal? AQA a nível de biologia

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Cutibacterium acnes complexos clonais exibem várias taxas de crescimento em frascos de hemocultura usados ​​para diagnosticar infecções relacionadas a dispositivos ortopédicos

Frascos de hemocultura (BCBs) são amplamente usados ​​para melhorar o diagnóstico de infecções relacionadas a dispositivos ortopédicos. Os dados são escassos sobre o crescimento de Cutibacterium acnes e seus genótipos em BCBs em condições clínicas da vida real.

Foram estudados 39 casos de artroplastia de revisão para os quais pelo menos uma amostra intra-operatória rendeu um puro C. acnes cultura de BCBs anaeróbicos (BD Bactec Lytic / 10 Anaerobic / F [Lytic Ana]) e / ou meios sólidos. Genotipagem de C. acnes isolados dos 39 casos permitiram: i) a identificação de 49 isolados não redundantes pertencentes a quatro complexos clonais (CCs): CC18, CC28, CC36 e CC53 e ii) a determinação de cepas infectantes e contaminantes. Em condições clínicas da vida real, Lytic Ana sozinha foi mais frequentemente positiva para contaminantes do que cepas infecciosas (18/36 [50%] contra 2/13 [15,4%] p = 0,047). Os valores de tempo para detecção (TTD) em Lytic Ana foram mais curtos para CC53 do que outros CCs (média [SD] TTD: 77 [15] contra 165 [71] horas p = 0,02). O CC53 foi confirmado para crescer mais rápido do que outros CCs através do estudo de um painel ampliado de 70 genotipados C. acnes cepas inoculadas em vitro em frascos Lytic Ana (média [SD] TTD: 73 [13] contra 122 [50] horas p & lt 0,001).

O uso de BCBs Lytic Ana em ortopedia aumenta a taxa de recuperação de C. acnes mas leva ao isolamento de proporcionalmente mais contaminantes do que verdadeiras cepas de infectantes. Os valores de TTD são muito mais curtos para as cepas CC53, independentemente de serem infecciosas ou contaminantes. O TTD não reflete apenas a carga bacteriana das amostras, mas também as características relacionadas aos complexos clonais.


Cultura de célula única: significado, princípio, fatores e importância | Cultura de tecido vegetal

A cultura de uma única célula é um método de cultivo de uma única célula isolada assepticamente em um meio nutriente sob condições controladas.

Princípio de cultura de célula única:

O princípio básico da cultura de uma única célula é o isolamento de um grande número de células vivas intactas e sua cultura em um meio nutriente adequado para o seu crescimento e desenvolvimento necessários. Células individuais podem ser isoladas de uma variedade de tecidos e órgãos de plantas verdes, bem como de tecido caloso e suspensão de células. Células únicas do tecido vegetal intacto (folha, caule, cladódio da raiz, etc.) são isoladas mecanicamente ou enzimaticamente.

O isolamento mecânico envolve rasgar ou cortar o explante esterilizado de superfície para expor as células, seguido de raspagem das células com um bisturi fino para liberar as células individuais na esperança de que permaneçam intactas. Mas muito poucas células vivas são obtidas com muito tempo e esforço. A trituração suave de explante esterilizado de superfície em um pilão esterilizado seguido de limpeza das células por filtração e centrifugação é agora amplamente usada para o isolamento mecânico em grande escala de células viáveis.

Uma forma consideravelmente mais eficiente de isolamento em larga escala de células livres da superfície esterilizada é dissolver o material de cimentação intercelular, isto é, pectina, por tratamento com pectinase ou macerozima. A enzima macerou o tecido a partir do qual um grande número de células variáveis ​​pode ser obtido. A particularidade do isolamento enzimático de células é que foi possível obter a preparação pura de células viáveis ​​com menos esforço e tempo.

As células individuais são tradicionalmente isoladas do tecido de calo friável estabelecido e da cultura de suspensão de células. Mecanicamente, células únicas são cuidadosamente isoladas da suspensão de células ou calo friável com uma agulha ou capilar de vidro fino. Alternativamente, o tecido friável é transferido para meio líquido e o meio é continuamente agitado por um agitador.

A agitação do meio líquido rompe e dispensa as células individuais e aglomerados de células no meio. Como resultado, ele produz uma suspensão de células. A suspensão de células é primeiro filtrada para remover aglomerados de células e o filtrado é então centrifugado para coletar as células individuais do pellete.

A única célula isolada pode ser cultivada em meio líquido ou em meio sólido. Existem cinco métodos básicos que são usados ​​para a cultura de células individuais, como a técnica de enfermagem de jangada de papel, a técnica de placa de Petri, a técnica de microcâmaras, a técnica de microgotas e a técnica de galvanização com tecido de enfermagem. Na cultura, as células individuais se dividem e se dividem para formar um tecido caloso. Esse tecido caloso também retém a capacidade de regenerar as plântulas por meio da organogênese e da embriogênese.

Fatores que afetam a cultura de células individuais:

1. A composição do meio para o crescimento da cultura de células individuais é geralmente mais complexa do que a cultura de calos e suspensão de células. Por exemplo, as células Convolvulus requerem uma citocinina e aminoácidos que não são necessários para a cultura do calo dessa espécie.

2. A indução da divisão de células individuais usando a técnica de jangada de papel indica que as células isoladas obtêm o nutriente essencial exato da massa do calo. Foi sugerido que a massa do calo lixivia o nutriente essencial através da membrana plasmática das células.

3. No caso da técnica de plaqueamento de placa de Petri, a densidade inicial da célula de plaqueamento é muito crítica.

Importância da cultura de célula única:

A técnica de cultura de uma única célula é muito importante para os estudos fundamentais e de mutação e tem ampla aplicação industrial.

1. A cultura de uma única célula pode ser usada com sucesso para obter clones de uma única célula.

2. As plantas podem ser regeneradas a partir do tecido caloso derivado dos clones de uma única célula (Fig. 9.6).

3. A ocorrência de alto grau de variabilidade espontânea no tecido cultivado e sua exploração por meio do cultivo unicelular são muito importantes em relação aos programas de melhoramento das culturas.

4. Um dos maiores problemas de reprodução por mutação em plantas superiores é a formação de quimeras após o tratamento mutagênico de organismos multicelulares. A este respeito, o método de cultura de célula única é mais eficiente. As células isoladas podem ser tratadas como um sistema microbiano para o tratamento de mutagênicos e para a seleção de mutantes.

Na prática, células individuais são cultivadas em um meio contendo os compostos mutagênicos e as linhas de células em proliferação são isoladas. A natureza mutante das linhas de células selecionadas pode ser confirmada regenerando as plantas e comparando seus fenótipos com uma planta normal. Muitas linhagens de células resistentes a análogos de ácido de munição, antibióticos, herbicidas, toxinas fúngicas, etc. foram selecionadas por este método mais simples.

5. Muitas plantas sintetizam vários compostos naturais importantes na forma de alcalóides, esteróides, etc. Alguns desses compostos naturais são altamente medicinais. Vários pesquisadores relataram a síntese de quantidades várias vezes maiores de alcalóides por cultura de células do que o conteúdo de alcalóides na planta intacta. Assim, do ponto de vista comercial, a cultura unicelular em larga escala pode se tornar uma técnica valiosa para a produção industrial desse importante composto natural.

6. Biotransformação significa a conversão celular de um composto substrato fornecido exogenamente não disponível na célula ou o precursor de um composto celular particular em um novo composto ou em compostos conhecidos em quantidades maiores.

Uma célula pode ser descrita como uma fábrica metabólica onde um grande número de sistemas enzimáticos estão trabalhando. Quando as células são alimentadas com análogos ou compostos intermediários ou precursores de uma via metabólica, as células as colocam imediatamente na via metabólica particular e ligam sua maquinaria para a produção do composto particular. A cultura de uma única célula é um sistema ideal para o estudo da biotransformação.

Geralmente, duas abordagens estão sendo seguidas para estudos de biotransformação usando cultura de células únicas, como:

(i) As células são alimentadas com compostos de substrato normalmente não disponíveis para a planta. O objetivo principal dessa alimentação é a obtenção de um novo composto por meio do processo de biotransformação.

(ii) As células são alimentadas com o precursor de um composto disponível na planta. O principal objetivo dessa alimentação é aumentar a produção de um composto.

7. Verificou-se que a indução de poliploidia é muito útil para o melhoramento de plantas para superar o problema de esterilidade associado a híbridos de plantas não relacionadas. A poliploidia pode ser facilmente alcançada por cultura de uma única célula.

Um grande número de híbridos geneticamente estéreis existe no gênero Saccharum. Quando a cultura de células de tal híbrido estéril é tratada com 50 mg / L de colchicina durante 4 dias, verificou-se que cerca de 48% dessas células tratadas se tornam uniformemente poliplóides. Essas células poliplóides são então induzidas a regenerar um grande número de plantas férteis. A este respeito, a cultura de células é muito útil com outras culturas também.


Assista o vídeo: Como História cai nos vestibulares isolados. Prof. Rafael Chaves (Dezembro 2021).