Em formação

30: Hidrólise de Caseína - Biologia


Objetivos

  • Identifique as reações associadas ao crescimento em ágar de leite desnatado

A enzima caseinase é secretada para fora das células (um exoenzima) na mídia circundante, catalisando a quebra da proteína do leite, chamada caseína, em pequenos peptídeos e aminoácidos individuais que são então absorvidos pelo organismo para uso de energia ou como material de construção. A reação de hidrólise faz com que o ágar de leite, normalmente a opacidade do leite real, limpe a área de crescimento à medida que a proteína caseína é convertida em produtos finais solúveis e transparentes - pequenas cadeias de aminoácidos, dipeptídeos e polipeptídeos.

MATERIAIS NECESSÁRIOS

  • 1 placa de ágar com leite desnatado por mesa

O PROCEDIMENTO

  1. Execute este teste usando sua bactéria desconhecida.
  2. Inocular o organismo na placa em linha reta ou em zigue-zague.
  3. Incubar a 25º C ou 37º C.
  4. Registre os resultados de sua bactéria desconhecida em seu diário.

INTERPRETAÇÃO

reação fraca

PERGUNTAS

  1. Qual é a diferença entre uma reação + fraca e uma reação + forte na placa de ágar?
  2. O substrato para esta enzima é _____.

Caseína

Caseína (/ ˈ k eɪ s iː n / KAY-see-n, do latim caseus "queijo") é uma família de fosfoproteínas relacionadas (αS1, αS2, β, κ). Essas proteínas são comumente encontradas no leite de mamíferos, compreendendo cerca de 80% das proteínas do leite de vaca e entre 20% e 60% das proteínas do leite humano. [1] Os leites de ovelha e búfala têm um teor de caseína mais alto do que outros tipos de leite com leite humano com um teor de caseína particularmente baixo. [2]

A caseína tem uma grande variedade de utilizações, desde ser o principal componente do queijo até à utilização como aditivo alimentar. [3] A forma mais comum de caseína é caseinato de sódio. [4] No leite, a caseína passa por separação de fases para formar micelas de caseína, um tipo de condensado biomolecular secretado. [5]

Como fonte de alimento, a caseína fornece aminoácidos, carboidratos e dois elementos essenciais, cálcio e fósforo. [6]


Influência das dietas de caseína e hidrolisado de caseína na recuperação nutricional de ratos famintos

Fundo: O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos de duas dietas, que diferiram quanto à fonte protéica (caseína e hidrolisado de caseína), na recuperação nutricional e reparo intestinal de ratos desnutridos ao desmame após jejum de 3 dias. Alterações profundas na estrutura intestinal e sinais de desnutrição apareceram após o período de inanição.

Métodos: O hidrolisado de caseína foi preparado por hidrólise enzimática e ultrafiltração. Os ratos foram alimentados com dieta à base de caseína ou à base de hidrolisado de caseína durante 96 horas. Ratos Wistar machos alimentados normalmente ao desmame receberam dieta de caseína por 7 dias e foram usados ​​como controles. Foram estudadas as atividades da acetilcolinesterase hepática, glutamato desidrogenase, perfis de aminoácidos séricos, oligossacaridases jejunais, fosfatase alcalina e atividades da leucina aminopeptidase. A permeabilidade intestinal às proteínas intactas também foi testada usando ovalbumina e medindo sua concentração no soro.

Resultados: As atividades das enzimas intestinais e hepáticas e os perfis de aminoácidos séricos atingiram valores normais após 96 horas da realimentação, independentemente da dieta utilizada. A atividade da glutamato desidrogenase permaneceu maior em ambos os grupos de dieta. A permeabilidade intestinal à ovalbumina permaneceu significativamente aumentada apenas no grupo alimentado com dieta com caseína.

Conclusões: Nossos resultados mostram que 4 dias de realimentação são suficientes para a recuperação intestinal completa após o jejum, desde que a fonte de proteína da dieta seja um hidrolisado de caseína. Sugerimos que os pacientes com desnutrição ou síndrome de má absorção devam ser alimentados com fórmula composta de hidrolisados ​​de proteínas enzimáticas (devido à sua baixa antigenicidade) em vez de fórmulas entéricas compostas de proteínas intactas.


Relação entre o grau de hidrólise de caseína e liberação de fosfopeptídeo

Em uma abordagem para desenvolver um processo em escala comercial para a produção de fosfopeptídeos de caseína contendo a sequência de agrupamento −SerP − SerP − SerP − Glu − Glu–, estudamos a relação entre a hidrólise de caseína e a liberação de fosfopeptídeos. Os graus de hidrólise (DH) de caseína usando Novo tripsina PTN 3.0 S e pancreatina 4NF independentemente, em razões enzima para substrato (E [razão] S) de 1 [razão] 50-1 [razão] 1600 (por peso), foram determinado usando o método pH-stat. Fosfopeptídeos de caseína (CPP) foram precipitados seletivamente usando Ca 2+ e etanol a partir dos hidrolisados ​​clarificados com ácido. Os precipitados foram analisados ​​por eletroforese capilar de alto desempenho para calcular rendimentos de fosfopeptídeos individuais com base nos coeficientes de extinção dos peptídeos purificados. Os peptídeos individuais foram purificados por HPLC de fase reversa e FPLC4 de troca aniônica e caracterizados por espectrometria de massa MALDI-TOF e análise de sequência de aminoácidos. Para ambas as enzimas, a redução da razão E [razão] S resultou em reduções na DH e na liberação do CPP, e um aumento no comprimento da cadeia do peptídeo. O comprimento de cadeia mais longo compensou a redução na liberação de modo que os rendimentos gravimétricos das preparações de CPP permaneceram relativamente constantes. Para Novo tripsina, os maiores rendimentos dos principais peptídeos de agrupamento (β-caseína (CN) f (1-25), α s1 -CNf (59-79), α s2 -CNf (1-21), α s2 -CNf ( 46-70) e peptídeos relacionados) nos precipitados seletivos foram obtidos em um DH de caseína de 17%. Em valores de DH mais baixos (9-15%), houve uma diminuição no rendimento dos peptídeos derivados de α s1 -CN e α s2 -CN, enquanto o rendimento dos peptídeos de cluster derivados de β-CN permaneceu relativamente constante. Verificou-se que o CPP produzido com pancreatina estava truncado em todas as razões E [razão] S, em relação ao CPP tríptico, devido a níveis mais elevados de atividades quimiotrípticas e carboxipeptidase na pancreatina. Os maiores rendimentos das formas truncadas dos principais peptídeos de agrupamento usando pancreatina foram obtidos em uma DH de caseína de 19-23%.


Assista o vídeo: BROMATOLOGIA: Leche Caracteristicas Nutricionales (Dezembro 2021).