Em formação

Ativação do genoma embrionário


A ativação do gene embrionário é um processo pelo qual o embrião começa a transcrever seu genoma recém-formado. Como a ativação do gene embrionário ocorre durante os estágios iniciais, o genoma paterno pode não ter qualquer influência nesse estágio.

Agora, minha pergunta é por que apenas o genoma materno desempenha um papel na ativação do gene embrionário? O genoma paterno tem um papel na ativação do genoma embrionário anterior / pós?


O pró-núcleo se funde e ocorre a descondensação e agora a célula é chamada de zigoto. Existe uma fase denominada transição da blástula média (MBT), até a qual apenas os produtos maternos (fatores citoplasmáticos como RNAs, proteínas e ribossomos) são utilizados. Após o MBT, o zigoto começa a expressar seus próprios genes dos alelos paternos e maternos. No entanto, certas regiões genômicas são impresso o que significa que um dos alelos é silenciado epigeneticamente. Pode ser paterno ou materno.


A acetilação de histona H3K27 é dispensável para aumentar a atividade em células-tronco embrionárias de camundongo

O H3K27ac é bem conhecido como um marcador para potenciadores ativos e um ótimo indicador da atividade do potenciador. No entanto, seu impacto funcional na transcrição não foi caracterizado. Ao substituir a lisina 27 na variante de histona H3.3 por arginina em células-tronco embrionárias de camundongo, diminuímos a grande maioria de H3K27ac em potenciadores. No entanto, o transcriptoma não é perturbado nessas células mutantes, provavelmente porque as outras características do intensificador permanecem praticamente inalteradas, incluindo acessibilidade à cromatina, H3K4me1 e acetilação de histona em outros resíduos de lisina. Nossos resultados revelam claramente que o H3K27ac sozinho não é capaz de determinar funcionalmente a atividade do intensificador.


A transição materno-zigótica

Célia Baroux, Ueli Grossniklaus, em Current Topics in Developmental Biology, 2015

Resumo

A transição materno-zigótica (MZT) define uma fase de desenvolvimento durante a qual o embrião se emancipa progressivamente de um controle de desenvolvimento baseado em grande parte nas informações maternas. O MZT é uma leitura funcional de dois processos: a liberação de informações maternas e o de novo expressão dos alelos parentais herdados habilitados pela ativação do genoma zigótico (ZGA). Nas fábricas, por muitos anos o debate sobre se o MZT existe se concentrou apenas no ZGA. No entanto, vários estudos recentes fornecem evidências de um alívio progressivo do controle materno sobre a embriogênese que está correlacionado com um ZGA gradual, um processo que é controlado pela própria mãe. No entanto, vários exemplos de genes zigóticos que são expressos e / ou funcionalmente necessários no início da embriogênese demonstram uma certa flexibilidade na dinâmica e na cinética do MZT entre as espécies de plantas e também entre os híbridos intraespecíficos.


As modificações das histonas são os influenciadores do despertar do genoma zigótico

Imagens baseadas em Fab para monitorar a dinâmica da transcrição ativa e modificações de histonas durante ZGA em embriões de peixe-zebra vivos revelaram coordenação espaço-temporal dentro de núcleos únicos, onde a acetilação de H3K27 foi concentrada em focos distintos no agrupamento de genes miR-430 antes de sua transcrição. Essas observações, juntamente com os ensaios do inibidor, sugerem que o H3K27ac precede a transcrição ativa durante o ZGA. Crédito: Tokyo Tech

O peixe-zebra é um importante organismo modelo em biologia. Humanos e peixes-zebra compartilham 70 por cento de seus genes, e mais de 80 por cento dos genes humanos associados a doenças são conhecidos por terem uma contraparte do peixe-zebra. Além disso, toda a sequência do genoma foi identificada e é mais eficiente para criar peixes do que ratos.

Seu desenvolvimento, entretanto, é um pouco diferente do dos mamíferos. Embora os peixes se reproduzam sexualmente, como todos os vertebrados, a fertilização do óvulo é externa, pois tanto o óvulo quanto o esperma são liberados na água. Apesar dessa diferença importante, a maioria das sequências envolvidas na síntese de proteínas associadas ao desenvolvimento e regulação embrionária é conservada entre as espécies.

Isso significa que alguns dos blocos de construção básicos que dão às células as instruções de como construir um organismo vivo são conservados entre as espécies. Em vez de se livrar dessas sequências, a evolução regula sua expressão por meio de modificações no DNA genômico e nas proteínas histonas, em torno das quais o DNA é ligado. Esses "fatores epigenéticos", como os cientistas os chamam, determinam se os genes se tornam funcionais ou não porque alteram a composição química e / ou estrutural do DNA. Essa regulação do que se torna o que é particularmente importante quando um organismo se desenvolve.

Um grupo de cientistas da Tokyo Tech, liderado pelo professor Hiroshi Kimura, começou a estudar mudanças epigenéticas durante o desenvolvimento do peixe-zebra. O professor Kimura diz: "A conservação estrutural de histonas e enzimas cruciais para a transcrição (ou seja, RNA polimerases II), bem como o fato de embriões de peixe-zebra serem transparentes, os torna um modelo perfeito para estudar o papel dessas modificações no desenvolvimento de organismos vivos."

(A) Esquema de experimentos. Fabs marcados com fluorescência preparados a partir de anticorpos específicos para modificação são injetados em embriões de peixe-zebra em estágio de 1 célula, que são então montados para uma folha de luz (SiMView) ou um microscópio confocal (FV1000). (B) Imagens representativas tiradas com um microscópio SiMView. Fabs específicos para ARN polimerase II ativa fosforilada (RNAP2 Ser2ph) e histona H3 acetilada na 9ª lisina (H3K9ac) foram simultaneamente injetados e fotografados. Os Fabs RNAP2 Ser2ph foram claramente concentrados nos núcleos em torno do estágio de células 1k, enquanto os Fabs H3K9ac foram enriquecidos em núcleos do estágio de 8 células. Barra de escala: 100 μm. Crédito: Tokyo Tech, Development

Usando marcação de modificação endógena ao vivo baseada em fab, ou FabLEM, uma técnica para visualizar a dinâmica de modificações pós-tradução usando anticorpos específicos em células vivas (Figura 2), a equipe observou RNA polimerase II ativa durante a ativação do genoma zigótico (ZGA), ou o processo durante o qual o desenvolvimento do embrião fica sob controle do zigoto ou do próprio embrião em desenvolvimento, em vez do material depositado pela mãe. Embora o momento dessa transição seja específico da espécie, ela também ocorre em mamíferos.

Nos embriões em estágio de 512 células, a acetilação de H3K27 é acumulada (seta H3K27ac em magenta) antes do início da transcrição, conforme indicado pela RNA polimerase II fosforilada ativa (seta RNAP2 Ser2ph em verde). Imagens ampliadas do locus miR-430 também são mostradas. Barra de escala: 10 μm. Crédito: Tokyo Tech, Development

Em seguida, a equipe comparou as mudanças na modificação das histonas com o momento da ativação do genoma. Um dos principais achados de seus estudos foi que a acetilação que ocorre no dia 27 de lisina na histona H3, ou H3K27, fica concentrada antes da transcrição ativa (Figura 3). A visualização de transcritos do gene mais antigo ativado miR-430 junto com a acetilação de H3K27 confirmou os achados, e o inibidor de transcrição não evitou o acúmulo de acetilação de H3K27. O que os resultados sugerem é que a acetilação do H3K27 é um fator epigenético que desperta o genoma para a transcrição.

Como a RNA polimerase II está presente em todas as espécies, o método também pode ser aplicado para estudar o desenvolvimento em outros organismos vivos. “Isso abre a possibilidade de novas pesquisas sobre a ligação entre a regulação da transcrição e a organização nuclear”, comenta o professor Kimura.


Regulação da ativação do gene zigótico no embrião de camundongo pré-implantação: ativação global e repressão da expressão do gene

Sobreposta à ativação do genoma embrionário no embrião de camundongo pré-implantação está a formação de um estado repressivo transcricional durante o estágio de duas células. Essa repressão parece mediada no nível da estrutura da cromatina, porque é revertida pela indução da hiperacetilação da histona ou pela inibição do segundo ciclo de replicação do DNA. Relatamos que de mais de 200 amplicons analisados ​​por exibição diferencial de mRNA, cerca de 45% deles são reprimidos entre os estágios de duas e quatro células. Esta repressão é pontuada como uma diminuição na expressão do amplicon que ocorre entre os estágios de duas e quatro células ou na capacidade de tricostatina A (um inibidor de histona desacetilases) ou afidicolina (um inibidor de DNA polimerases replicativas) para aumentar o nível de expressão do amplicon. Os resultados deste estudo também indicam que cerca de 16% dos amplicons analisados ​​provavelmente são novos genes cuja sequência não corresponde às sequências nas bases de dados atuais, enquanto cerca de 20% das sequências expressas durante essa transição provavelmente são sequências repetitivas. Por último, a indução da hiperacetilação da histona nos embriões de duas células inibe a clivagem para o estágio de quatro células. Esses resultados sugerem que a ativação do genoma é global e relativamente promíscua e que uma função do estado transcricionalmente repressivo é ditar o perfil apropriado de expressão gênica que seja compatível com o desenvolvimento posterior.


Materiais e métodos

Modelos de camundongos, pacientes humanos CRC e coleção de tumor

Tumores de camundongo

Todos os tumores foram isolados como lesões de ocorrência espontânea em Apc Min/+ [57], Smad3 - / - [58], e Tgfb1 -/- Rag2 - / -, coletado entre três e nove meses de idade, dependendo do modelo (para uma revisão, consulte [6]). As únicas exceções foram dois Apc Min/ + tumores, UW_3_2778 e UW_6_2748, que tinham 13 e 14 meses e os três Tgfb1 -/- Rag2 - / - tumores, todos os cinco com características histológicas de carcinoma localmente invasivo [7]. Camundongos de três a quatro meses de idade de várias linhagens consanguíneas AXB recombinantes foram tratados com doses de AOM escolhidas para aumentar as diferenças na suscetibilidade entre as linhagens [11]. Os camundongos receberam quatro doses i.p. injeções de 10 mg de AOM por kg de peso corporal, e os tumores foram coletados seis meses após a primeira injeção. Os animais foram sacrificados com CO2, cólons removidos, lavados com solução salina tamponada com fosfato (PBS) 1 × e dispostos em papel Whatman 3 MM. Um resumo das cepas de camundongos, alelos mutantes e laboratórios de origem é apresentado na Tabela 5. Todos os tumores foram obtidos apenas do cólon, o segmento particular do qual é indicado no banco de dados Gene Expression Omnibus (GEO) [59] informações de amostra armazenadas ( GSE5261). A maioria de Tgfb1 -/- Rag2 -/- e Smad3 Tumores - / - ocorrem no ceco e cólon proximal e todas as amostras isoladas para caracterização foram obtidas a partir daí. Em contraste, os tumores isolados de Apc Min/ + e camundongos AOM ocorreram predominantemente no cólon médio e distal. Uma pequena porção do tumor foi colocada em formalina para histologia, com o restante finamente dissecado em RNAlater (Ambion Inc., Austin, TX, EUA) e armazenado a -20 ° C. O RNA do cólon adulto normal para referência foi obtido a partir de amostras de cólon inteiras colhidas de dez camundongos machos C57BL / 6 de oito semanas de idade. O tecido foi lisado em Trizol Reagent (Invitrogen Systems Inc., Carlsbad, CA, USA) e homogeneizado. O RNA total foi purificado usando um kit Qiagen (USA-Qiagen Inc., Valencia, CA, USA).

Amostras humanas: coleta / biópsias, aspectos regulatórios, conformidade e consentimentos informados

O protocolo de coleta de amostras e análises no H Lee Moffitt Cancer Center e Research Institute foram descritos anteriormente [37]. As informações coletadas com as amostras para este estudo incluem critérios de estadiamento de tumor sólido para tumor, nódulos e metástases (TNM), critérios de estadiamento / apresentação de Dukes, diagnóstico patológico e critérios de diferenciação.

Isolamento de RNA

Todas as amostras de RNA foram purificadas com o reagente Trizol de tumores finamente dissecados e submetidas à triagem de controle de qualidade usando o Agilent BioAnalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).

Procedimentos de microarray e análise de dados

Matrizes de cDNA de camundongo

Os tumores de camundongos foram analisados ​​em matrizes de cDNA de camundongo de 20 K com Vanderbilt University Microarray Core (VUMC), compostas principalmente de produtos de PCR derivados de três fontes: a biblioteca de cDNA de camundongo do Instituto Nacional de Envelhecimento 15 K, o conjunto de 5 K de camundongo da Research Genetics e um adicional conjunto de cDNAs mapeados para transcrições RefSeq. Rotulagem, hibridização, varredura e avaliação quantitativa dessas matrizes de canais de duas cores foram realizadas de acordo com os protocolos VUMC [60] usando um padrão de referência universal de camundongo inteiro (RNA fetal de camundongo inteiro E17.5). As matrizes foram analisadas por GenePix versão 3.0 (MDS Inc., Sunnyvale, CA, EUA), marcadas e filtradas para medições não confiáveis, com relações de canal de corante corrigidas usando Lowess e normalização de correção específica de corante conforme descrito anteriormente [15].

Matrizes de oligonucleotídeos de Afimetria Humana

As amostras de RNA humano foram marcadas para hibridização com microarranjos Affymetrix HG-U133plus2 usando o protocolo de rotulagem padrão recomendado pela Affymetrix (protocolo de rotulagem em pequena escala versão 2.0 com 0,5 μg de RNA total do Boletim Técnico da Affymetrix). Microarrays foram escaneados com MicroarraySuite versão 5.0 para gerar arquivos 'CEL' que foram processados ​​usando o algoritmo RMA implementado pelo Bioconductor [15].

Estratégia de análise

Os quatro modelos de camundongo diferentes de CRC foram comparados para diferenças específicas do modelo, em seguida, comparados aos estágios de desenvolvimento do cólon de camundongo e, em seguida, a amostras de CRC humano (Figura 1). Os dados da matriz de amostra de tumor de camundongo são compostos de taxas de rotulagem Cy3: Cy5 normalizadas Lowess de cada amostra de tumor individual versus um RNA de referência de camundongo fetal total E17.5 universal (descrito usando as diretrizes MIAME no banco de dados NCBI GEO sob o número de acesso de série GSE5261). A primeira abordagem para referenciar foi comparar as proporções normalizadas em toda a série de tumores. Para fazer isso, para cada gene, a proporção corrigida de Lowess para cada elemento de sonda (amostra versus referência total de camundongo fetal E17.5) foi dividida pela proporção média para essa sonda em toda a série de amostras de tumor. Isso é denominado razão de expressão mediana por tumor e foi útil para identificar, agrupar e visualizar diferenças que ocorrem entre as diferentes amostras de tumor. Como coletamos anteriormente dados de expressão de camundongos para amostras de cólon E13.5-E18.5 normais de camundongos C57BL / 6J consanguíneos e camundongos CD-1 puros [15] usando a referência de camundongo fetal total E17.5 idêntica, isso nos permitiu combinar os dados diretamente. Perfis de expressão diferencial nos tumores foram combinados com níveis de expressão de gene de desenvolvimento relativo por comparações diretas de razões determinadas dentro de cada série experimental. As comparações iniciais foram feitas entre os dados do tumor normalizado mediano para os níveis de expressão gênica observados nas amostras de cólon E13.5-E18.5 e adulto (oito semanas pós-natal), que foram referenciadas a amostras E13.5 ou ao cólon adulto. A última abordagem subsequentemente permitiu a comparação mais ampla de dados de camundongos e humanos usando mapeamento ortólogo de genes. Fenômenos correlacionados podem ser observados a partir de qualquer uma das diferentes estratégias de referência.

Ortólogo de gene interorganismo e estratégia de comparação interplataforma

Pares de genes ortólogos humanos e de camundongo (12.693) foram curados usando os bancos de dados de Informática do Genoma do Mouse (MGI The Jackson Laboratory) [61] e do National Center for Biotechnology Information (NCBI) Homologene [62]. Elementos ou recursos individuais de microarray foram mapeados para estes. Os IDs RefSeq concatenados humanos e de camundongo foram usados ​​como o ID composto para o par de genes ortólogos na definição do genoma ortólogo. Os cDNAs de camundongos da NIA / Research Genetics foram mapeados para ortólogos humanos usando uma variedade de recursos, geralmente por meio do recurso Stanford Online Universal Reference [63]. As atribuições de transcrições de genes foram tornadas únicas, escolhendo-se a transcrição correspondente mais longa. Para mapear os dados da matriz Affymetrix de humanos e ratos no genoma ortólogo, usamos uma abordagem de correspondência de sequência. Primeiro, obtivemos sequências transcritas de humanos e camundongos de RefSeq [64] e sequências de sondas do site do fabricante [65]. Em seguida, calculamos todos os pares de transcrição sonda perfeitos. Excluímos as sondas que correspondiam a vários símbolos de genes, mas aceitamos sondas que correspondiam a vários transcritos. Os conjuntos de sondas foram designados para representar uma determinada transcrição se pelo menos 50% das sondas de correspondência perfeita do conjunto de sondas correspondessem a essa transcrição. Os identificadores de transcrição recém-atribuídos foram então usados ​​para mapear conjuntos de sondas para genes ortólogos. Uma vez que alguns transcritos têm múltiplas representações de conjunto de sondas em microarrays Affymetrix e cDNA para um identificador ortólogo, nós empregamos um Ad hoc estratégia para usar a média desses conjuntos de sondas ou cDNAs que exibiram regulação consistente em uma série de amostras. Em tais casos, os sinais dos conjuntos de sondas reguladas que foram interpretados como estando em concordância foram calculados e atribuídos ao ortólogo correspondente. Excluímos conjuntos de sondas ou cDNAs que sabíamos corresponder à sequência genômica não transcrita testada usando BLAT no site UCSC Goldenpath [66].

Atribuições de ortólogos do gene RefSeq de camundongo-humano podem ser encontradas em GenomeTrafac [67, 68]. Todas as atribuições ortológicas e anotações de mapeamento cruzado de espécies foram incorporadas às anotações associadas ao genoma Affymetrix HG-U133 plus2.0. As razões de expressão gênica obtidas para as amostras de camundongo foram então representadas como valores de expressão dentro da plataforma humana para todos os conjuntos de sondas mapeados para o ortólogo do gene de camundongo correspondente. Os dados da série de amostras humanas primárias, bem como os conjuntos de dados humanos e camundongos combinados, estão disponíveis no servidor de dados microarray do Cincinnati Children's Hospital Medical Center [69] no genoma HG-U133 sob as pastas KaiserEtAl_2006 (login de 'convidado' todos identificadores de gene ortólogo de plataforma cruzada estão contidos como campos de anotação na tabela de genoma HG-U133).

Abordagens estatísticas e de visualização de dados

A maior parte da normalização, referência de nível de expressão, comparações estatísticas e visualização de dados foram realizadas usando GeneSpring v7.0 (Silicon Genetics-Agilent (parte da Agilent Technologies). O teste exato de Fisher foi realizado online no servidor Exact Test do MATFORSK Fisher [70]. Para identificar características expressas diferencialmente entre duas ou mais classes, aplicamos o teste Wilcoxon-Mann-Whitney ou Kruskal-Wallis de GeneSpring, respectivamente. Para três ou mais classes, o teste não paramétrico inicial foi seguido pelo teste de Student-Newman-Keuls post-hoc teste. Os resultados das análises primárias foram corrigidos para efeitos de testes múltiplos aplicando a correção da taxa de descoberta falsa de Benjamini e Hochberg (FDR) [71]. Em geral, devido às estratégias de referência, bom desempenho técnico da plataforma e variação biológica moderadamente baixa dentro do grupo da expressão gênica, cortes rigorosos podem ser usados, ou seja, o nível de significância de FDR foi definido entre FDR & lt 5,10-5 e FDR & lt 5,10 -4. O agrupamento de K-médias foi realizado usando a ferramenta GeneSpring K-médias e a medida de similaridade de correlação de Pearson.

Análise baseada em ontologia de correlatos funcionais associados a agrupamentos de genes

Os agrupamentos de expressão gênica foram analisados ​​quanto à ocorrência de múltiplos genes envolvidos em categorias de função gênica relacionadas, comparando cada lista de genes agrupados regulados de forma coordenada a categorias dentro da Ontologia Genética, vias ou associações gênicas baseadas na literatura usando GATACA [72], Ontoexpress [73] e Ingenuity Pathway Analysis, versão 3 (IPA, Ingenuity Systems, Redwood City, CA, EUA) [74]. Para fazer isso, cada cluster indicado nas Figuras 2, 4, 5, 6 e 8 foi convertido em uma lista de identificadores de genes, carregado para o aplicativo e examinado quanto à super-representação de vários genes de uma ou mais redes moleculares ou funcionais ou associações de doenças desenvolvidas a partir da mineração de literatura. As redes desses genes focais foram geradas algoritmicamente com base nas relações de genes individuais, derivadas da revisão da literatura e usadas para identificar as funções biológicas e / ou processos patológicos associados mais significativos para cada grupo de genes. O teste exato de Fisher foi usado para calcular um p estimar a probabilidade de que uma determinada classificação funcional ou categoria de genes esteja associada a um determinado padrão ou grupo de expressão gênica mais do que seria esperado ao acaso. Para cada cluster, apenas as principais classes funcionais e caminhos canônicos são mostrados. A Figura 7a mostra um diagrama da via de sinalização canônica de WNT e uma rede de genes associados que era uma associação no topo da classificação dos clusters que exibiram superexpressão significativa em AOM e Apc Min/ + versus Smad3 -/- e Tgfb1 -/- Rag2 - / - modelos de mouse. Os genes ou produtos gênicos são representados como nós, e as relações biológicas entre os nós são representadas como bordas (linhas). Todas as bordas são apoiadas por pelo menos uma referência de literatura de um manuscrito ou de informações canônicas armazenadas na Base de Conhecimento Ingenuity Pathways.

QRT-PCR

Para confirmar a validade da normalização de dados e procedimentos de referência, bem como as atribuições de genes de cDNA das matrizes impressas usadas nas análises de microarray, usamos qRT-PCR para medir os níveis relativos de nove genes encontrados pela análise de dados de microarray para serem expressos diferencialmente (FDR & lt 5,10 -5) em tumores de Apc Min/ + e Smad3 -/- camundongos. RNAs totais de C57BL6 Apc Min/ + e 129 Smad3 - / - amostras de tumor (20 μg) foram transcritas reversamente para cDNA usando o High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems preparado com oligo-dT, Foster City, CA, EUA). As reações qRT-PCR (20 μl) foram configuradas em Placas de Reação MicroAmp de 96 poços (Applied Biosystems) usando 10 ng de modelo de cDNA em Taqman Universal PCR Master Mix e conjuntos de sonda de primer com 6-FAM-Assays-on-Demand ( Biossistemas aplicados). As reações foram executadas em um MX3000P (Stratagene, uma divisão da Agilent Technologies) com software de análise integrado. Os números de ciclo de limiar (Ct) foram determinados para cada gene alvo usando um algoritmo que atribui uma linha de base de fluorescência com base nas medições anteriores à amplificação exponencial. Os níveis de expressão relativa do gene foram calculados usando o método ΔΔCt [75], com o Gusb gene como um controle. A mudança de dobramento foi determinada em relação à expressão no cólon adulto normal de dois camundongos C57BL / 6J.

Imunohistoquímica

Os procedimentos imunohistoquímicos foram realizados conforme descrito [15]. Apc Min/ + e Smad3 Os tumores de cólon - / - foram rapidamente dissecados, fixados em paraformaldeído a 4% e incluídos em parafina antes de cortar seções de 10 μm de espessura. A recuperação do antígeno foi realizada fervendo por 20 minutos em tampão citrato, pH 6,0. As seções foram tratadas com peróxido de hidrogênio 0,3% em PBS por 30 minutos, lavadas em PBS, bloqueadas em PBS mais 3% de soro de cabra e 0,1% de Triton X-100, e então incubadas com anticorpos primários e anticorpo secundário anti-coelho de cabra conjugado com HRP (Sigma, St Louis, MO, EUA). Os complexos antígeno-anticorpo foram detectados com um kit de substrato de peroxidase DAB (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante.


Reconhecimentos

Os autores agradecem aos membros do laboratório Harrison e aos revisores pelo feedback útil sobre o manuscrito. K.N.S. foi apoiado em parte pelo prêmio T32 GM007215 do National Institutes of Health (NIH). M.M.H. foi apoiado pela concessão R01GM11694 do Instituto Nacional de Ciências Médicas Gerais e um Vallee Scholar Award.

Informação do revisor

Nature Reviews Genetics agradece B. Cairns, K. Kuznetsova, N. Vastenhouw e o (s) outro (s) revisor (es) anônimo (s) por sua contribuição para a revisão por pares deste trabalho.


A ativação aumentada de megacariócitos embrionários causa aneurismas no cérebro em desenvolvimento de camundongos sem podoplanina

Christopher Hoover, Yuji Kondo, Bojing Shao, Michael J. McDaniel, Robert Lee, Samuel McGee, Sidney Whiteheart, Wolfgang Bergmeier, Rodger P. McEver, Lijun Xia A ativação aumentada de megacariócitos embrionários causa aneurismas no cérebro em desenvolvimento de camundongos sem podoplanina. Sangue 2021 137 (20): 2756–2769. doi: https://doi.org/10.1182/blood.2020010310


Laboratório Günesdogan

Hackett JA *, Huang Y *, Günesdogan U *, Gretarsson KA, Kobayashi T, Surani MA.

O NANOG sozinho induz células germinativas em epiblasto preparado in vitro por ativação de intensificadores.

Murakami K *, Günesdogan U *, Zylicz JJ, Tang WWC, Sengupta R, Kobayashi T, Kim S, Butler R, Dietmann S, Surani MA.

O suprimento de histonas regula o tempo da fase S e a progressão do ciclo celular.

Günesdogan U, Jäckle H, Herzig A.

Últimas notícias

Elsa terminou sua tese de mestrado & # 8217s

Mila e Julia concluíram sua tese de mestrado

Parabéns a Mila e Julia, que são as primeiras alunas do nosso grupo a concluírem sua tese!

Cera garante companheirismo

Muitos parabéns à Cera, que recebeu uma bolsa de doutorado do Boehringer Ingelheim Fonds!

Afiliações

Laboratório Günesdogan

Departamento de Biologia do Desenvolvimento
Universidade de Göttingen, Alemanha
Faxe: +49 551 395416


Ativação da expressão do gene embrionário humano em embriões híbridos citoplasmáticos construídos entre oócitos bovinos e fibroblastos humanos

A transferência somática cruzada de todos os números (SCNT) fornece uma solução potencial para superar o problema da escassez de oócitos para clonagem terapêutica. Para caracterizar ainda mais o sistema, construímos embriões híbridos de citoplasma entre oócitos bovinos e fibroblastos humanos e examinamos a dinâmica da ativação do gene humano durante os estágios de pré-implantação. Os dados deste estudo mostraram que os genes embrionários humanos, OCT4, SOX2, NANOG, E-CADHERIN, assim como o beta-ACTIN, foram ativados por oócitos bovinos enucleados. A ativação de genes humanos foi correlacionada com o potencial de desenvolvimento dos embriões. A extensão da ativação do gene humano variou drasticamente e estava incompleta em uma grande proporção dos embriões. A ativação de genes humanos em embriões híbridos de citoplasma humano-bovino ocorre em um padrão temporal semelhante ao da espécie bovina. Os resultados deste estudo sugerem que os produtos do gene humano são necessários para que os embriões híbridos se desenvolvam até os estágios posteriores de pré-implantação. Facilitar a ativação do genoma humano pode melhorar as taxas de sucesso em SCNT de espécies cruzadas.


Assista o vídeo: Primeira e segunda semanas do desenvolvimento embrionário (Janeiro 2022).