Em formação

Unidade 8: Culturas puras - Técnicas de transferência asséptica e placas de estrias para isolamento - Biologia


Unidade 8: Culturas puras - técnicas de transferência asséptica e placas de estrias para isolamento

Técnicas Assépticas

1.- Esteja ciente de onde as bactérias podem ser encontradas e quais são os fatores ambientais que influenciam o crescimento das bactérias.

2.- Compreender o processo e a importância da rotulagem e incubação das placas de ágar de forma adequada.

3.- Aprender as práticas de técnicas assépticas necessárias para prevenir a contaminação cruzada

4.- Identificar o crescimento de bactérias na superfície de uma placa de ágar, um caldo de nutrientes e uma amostra de ágar.

5.- Use estimativas do número de colônias para chegar a conclusões sobre a quantidade de crescimento bacteriano.

6.- Determinar os efeitos da lavagem das mãos na abundância bacteriana. Determine os efeitos da desinfecção de bancada na abundância bacteriana.

7.- Definir: cultura pura, contaminação, técnicas assépticas.

8.- Conhecer as características do meio de caldo, da inclinação bacteriana e das placas de ágar.

9.- Identifique as etapas de transferência de caldo para caldo, inclinação para inclinação e caldo para prato.

1.- (1 ponto) Explique os seguintes conceitos

O que significa a frase ‘bactérias são onipresentes’?

2.- (1pt.) Liste dois locais em um laboratório onde as bactérias podem ser encontradas.

Liste dois locais, em um laboratório, onde bactérias nunca deveriam ser encontradas.

3.- (1pt.) O primeiro passo para trabalhar com qualquer tipo de meio é etiquetá-lo corretamente antes de usar.

Por que as placas de ágar são sempre rotuladas na parte inferior?

As placas de ágar são sempre incubadas de cabeça para baixo. Explique por quê.

4.- (1 pt.) As temperaturas de incubação são sempre indicadas em graus Celsius. A temperatura padrão de incubação de bactérias isoladas de espécimes humanos é:

A incubação de bactérias, isoladas de espécimes humanos, em temperaturas mais baixas irá desacelerar seu crescimento. Forneça a temperatura aproximada (em graus Celsius) das seguintes incubadoras:

Incubadora à temperatura ambiente:

Incubadora de temperatura do refrigerador:


ISOLAMENTO DE CULTURA PURA POR MÉTODOS DE PLACA DE DERRAMAMENTO | DILUIÇÃO EM SÉRIE | LOOP DILLUTION

MIRAR: - Efetuar o isolamento de cultura pura utilizando a técnica pour plate.

1. Livro prático de microbiologia farmacêutica do Prof Rageeb, K.D Baviskar, N.G ​​Patil, publicado por S. Vikas And Company (Medical Publisher), Edição 2018, Página No 61-63

2. Livro de Microbiologia Experimental (As Per PCI Syllabus) de Savita Mandan, Umesh Laddha, Sanjay Surana, publicado por Career Publication, Primeira edição, Página No 71-72

3. Microbiologia Farmacêutica (Conforme Regulamentação PCI) pelo Prof Chandrakant Kokare, Publicado por Nirali Prakashan, Primeira Edição, Página No. 4.2 & # 8211 4.3

CULTURA: - Cultura de solo isolado, Escherichia coli e Staphylococcus aureus.

APARELHO: - Frasco cônico, tubos de ensaio, placas de Petri, alça de arame de nicromo, béquer, suporte para tubos de ensaio, pipetas, lápis de marcação de vidro, queimador Busen.

EQUIPAMENTOS: - Autoclave, Contador de Colônia com Lupa, Forno de Ar Quente, Incubadora, Balança, Medidor de pH, Banho-maria.

INTRODUÇÃO: - O método da placa de despejo é geralmente o método de escolha para contar o número de bactérias formadoras de colônias presentes em uma amostra líquida. Neste método, uma quantidade fixa de inóculo (geralmente 1 ml) de um caldo / amostra é colocada no centro de uma placa de Petri estéril usando uma pipeta estéril. O ágar resfriado fundido (aprox. 15mL) é então despejado na placa de Petri contendo o inóculo e bem misturado. Após a solidificação do ágar, a placa é invertida e incubada a 37 e # 176C por 24-48 horas.

PRINCÍPIO DA TÉCNICA DA PLACA DE DERRAMAMENTO: - Na placa de vazamento, a diluição da cultura misturada é realizada diretamente em tubos de ensaio de meio ágar líquido. O meio é mantido no estado líquido, mantendo o meio em alta temperatura para permitir distribuições adequadas do inóculo. O meio é então preparado em placas de Petri e pode solidificar. Incube todas as placas em condições adequadas para o crescimento do microrganismo. Uma série de placas de ágar mostrando um número decrescente de colônias resultante da técnica de diluição.

PROCEDIMENTO DA TÉCNICA DA PLACA DE DERRAMAMENTO: -

1. Diluir a amostra bacteriana de forma que a concentração final da bactéria esteja na faixa de 30-300 cfu / 0,1-1,0ml

2. Prepare meio nutriente de ágar e transfira 15 a 20 ml de meio em cada tubo de ensaio.

3. Esterilize todos os utensílios de vidro no forno de ar quente e resfrie a uma temperatura de 42 a 45 & # 176C.

4. Pegue três tubos de ensaio esterilizados e três placas de Petri e marque usando lápis de vidro como A, B e C.

5. Transfira uma alça cheia de cultura no primeiro tubo de ensaio. Misture suavemente a cultura rolando o tubo entre as palmas das mãos.

6. Transfira uma alça cheia de cultura do primeiro tubo A para o segundo tubo B e misture um primeiro tubo inoculado.

7. Transfira uma alça cheia de cultura do segundo B para o terceiro tubo de ensaio C e misture conforme indicado na etapa um.

8. Todo o meio líquido inoculado é vertido em placas de Petri estéreis separadas. Após a solidificação do meio, coloque as placas de Petri em uma incubadora a 30-35 & # 176C por 48 horas em uma posição invertida.

OBSERVAÇÃO E RESULTADO: -

As colônias que aparecem nas placas de Petri A não são distintas, pequenas e se sobrepõem umas às outras. Nas placas de Petri, as colônias B são grandes, discretas e geralmente não se misturam com outras colônias. Nas placas de Petri C são observadas colônias maiores e isoladas com forma, cor, textura, tamanho e forma distintos. Da Placa A para C ocorre a diluição dos inóculos e apenas um número menor de microrganismos é permitido crescer nas placas de Petri C. As colônias são desenvolvidas na superfície e no subsolo para o meio.

VANTAGENS DO MÉTODO DE PLACA DE DERRAMAMENTO: -

1. Este método é usado para contar células viáveis.

2. Colônicos distintos separados são obtidos em meio sólido.

DESVANTAGENS DO MÉTODO DA PLACA DE DERRAMAMENTO: -

1. Os microrganismos são espalhados uniformemente no ágar líquido, portanto, os micróbios também estão presentes abaixo da superfície. Conseqüentemente, as colônias superficiais e sub-superficiais se desenvolveram e é muito difícil isolar e contar as colônias sub-superficiais.

2. Os micróbios que são sensíveis a temperaturas mais altas não podem ser isolados pela técnica de placa de vazamento porque a temperatura do ágar deve ser sempre alta para manter a consistência líquida. Conseqüentemente, o método da placa derramada é inadequado para isolamentos de microorganismos psicrofílicos.

3. Este método é tedioso, demorado e requer habilidade.

4. As bactérias aeróbias que ficam presas dentro do ágar não sobrevivem devido à falta de oxigênio.

5. Para cada diluição, você precisa de tubos separados.

6. É necessário controlar a temperatura específica, caso contrário, a mídia muito quente mata as bactérias presentes na amostra.


Ensaios e artigos de pesquisa "Técnicas assépticas e isolamento de cultura pura de bactérias".

Virtual Laboratório Unidade 3 1. Descreva resumidamente as etapas necessárias para a transferência asséptica bactérias de um desconhecido a um tubo de caldo líquido. Você pode ter que pesquisar isso usando o botão & quotT & quot (Conte-me mais sobre.) Para transferir assepticamente bactérias de um desconhecido a um tubo de caldo líquido, você deve queimar a alça ou fio antes de começar a esterilizá-lo. Em seguida, você remove as tampas dos tubos e inflama as bocas dos tubos para evitar a contaminação pelo ar. Quando tudo isso estiver feito, você terá.

Ácido Premium, antocianina, cor 709 palavras | 3 páginas

Api 20 # Relatório de Laboratório

Data: Quarta-feira, 16 de novembro de 2011 Holly Lawson - branco Título: API 20E Introdução: O princípio geral do experimento é usar uma bateria de testes bioquímicos para identificação de entéricos bactérias. Este sistema de teste consiste em uma tira contendo 20 câmaras, cada uma consistindo de um microtubo e uma cúpula para permitir o teste de 20 testes diferentes quase simultaneamente. Materiais: alça de inoculação, tubo de ensaio contendo 5 ml de soro fisiológico estéril, frasco de água para lavagem, API de plástico.

Aminoácido Premium, Pipeta, Catalase 544 Words | 3 páginas

Trabalho de laboratório de bactérias desconhecidas

O propósito do desconhecido bactérias laboratório tarefa era selecionar um desconhecido bactérias cultura e, por meio de uma série de testes metabólicos, identificar quais bactérias gênero residia no puro cultura recebido. Um caldo nutriente inoculado com bactérias cultura (numerado 45, doravante referido como U45) foi selecionado e uma placa de listras foi feita para isolar um puro cultura para uso durante toda a tarefa. A partir da placa listrada, várias lâminas foram feitas para determinar a morfologia do 45 desconhecido. Uma coloração de Gram.

Bactérias Premium, metabolismo, respiração celular 1738 Words | 7 páginas

Microbiologia exame final relatório de bactérias desconhecidas exemplo

Microbiologia DESCONHECIDA LAB RELATÓRIO Kateryna Petrakova INTRODUÇÃO Os microrganismos causam uma grande quantidade de doenças. Para os profissionais de saúde, é muito importante estar ciente de quais organismos são patogênicos e causadores de uma doença e, portanto, encontrar um tratamento adequado. Diferentes microrganismos requerem vários ambientes para se replicar e se tornarem perigosos para a saúde de uma pessoa. Parte integrante de qualquer tratamento médico é ser capaz de reconhecer e.

Bactérias Gram-negativas Premium, Microbiologia, Coloração 1749 Words | 7 páginas

Relatório de laboratório

Laboratório Relatório Identificação de Desconhecido Bactérias 10/03/05 - 01/04/05 Autores: Richard Hendricks, Jessica Prebish NMU Resumo: Caldo cultura 16 foram selecionados aleatoriamente pelo nosso grupo e submetidos a testes qualitativos para identificação taxonômica. o cultura pareceu homogêneo durante todo o período de teste e atualmente é mantido pelo departamento de Microbiologia da Northern Michigan University. Nós sugerimos que cultura 16 é um exemplo de Escherichia coli. Fundo: Técnicas usados ​​eram.

Premium Enterobacteriaceae, Coloração, Bactéria 1587 Palavras | 7 páginas

Relatório de laboratório desconhecido

Desconhecido Laboratório Relatório Microbiologia Desconhecida A Sonia Kabra 26 de novembro de 2014 Introdução Existem inúmeras razões para identificar o desconhecido bactérias. Alguns desses organismos possuem qualidades distintas que os diferenciam, como a exposição a determinados ambientes. Ao longo do semestre no laboratório, somos capazes de encontrar alguns dos poucos microrganismos com os quais nós, como humanos, entramos em contato. Com o conhecimento adquirido nas sessões de laboratório, agora podemos.

Premium Pseudomonas aeruginosa, Microbiologia, meio de crescimento 1022 Words | 4 páginas

Relatório de laboratório de bactérias desconhecidas

Bactéria desconhecida # 22 Objetivo O objetivo deste experimento era encontrar a identidade de dois desconhecidos bactérias no tubo de ensaio fornecido. Materiais • Circuito bacteriano • Queimador de Bunsen • Placa de Petri com ágar • Violeta de Cristal • Iodo de Gram • Etanol 95% • Safrin • Lâminas de Vidro • Microscópio • Desconhecido bactérias em tubo de ensaio. Procedimento No primeiro dia, uma placa foi riscada qualitativamente e deixada na.

Premium 629 palavras | 3 páginas

Relatório de laboratório de bactérias desconhecidas

Esse relatório irá detalhar como um projeto semelhante foi realizado a fim de identificar dois micóbios desconhecidos usando o técnicas que foram aprendidos ao longo do semestre. Iniciamos o projeto com o conhecimento de que teríamos que identificar um Gram (+) e também um Gram (-) das espécies que foram dadas e o experimento prosseguiu da seguinte forma. MÉTODOS As duas placas estriadas feitas da mistura de desconhecidos bactérias mostrou duas morfologias de colônia diferentes. Colônias de Bactérias Um were.

Bactérias Premium, Escherichia coli, Bacillus 559 Words | 3 páginas

Técnica asséptica

Asséptico Técnica baseia-se na consciência cirúrgica, ou seja, na motivação ética e profissional que regula os comportamentos do profissional em relação à transmissão de doenças. (Fuller) Todos os pacientes estão fadados a pegar uma infecção. Certas situações podem aumentar a vulnerabilidade, como distúrbios nas defesas do corpo, como contradições à anestesia, queimaduras graves ou um distúrbio imunológico. A principal diferença entre a sala de cirurgia e outros ambientes clínicos é que a área de operação tem alta.

Assepsia Premium, Scrubs, Técnica asséptica 578 Palavras | 3 páginas

Bactérias

Laboratório 11 Metodologia usando asséptico, um pouco culto bactérias foi inoculado no ágar TSA. Uma seqüência quádrica estava surgindo. A malha de inoculação foi aquecida e mantida fria por um tempo antes da próxima seqüência quadrática. Seis placas de ágar foram observadas por 24 horas à temperatura de 30ºC. Escolha um da colônia densa e faça um sub-cultura na nova placa de ágar. A etapa foi repetida para obter uma única colônia, que é puro colônia. a) Sequestro de bactérias da Metodologia de órgãos de peixes.


Caldo para Caldo ou Transferência de Caldo para Prato

1. Identifique o recipiente de destino da cultura (caldo estéril não inoculado em tubo ou meio sólido em placa).

2. Segurando seu laço como um lápis, insira-o na chama conforme ilustrado na Figura 1. A orientação do fio do laço na chama deve ser em

um ângulo de 30 graus para uma incineração adequada. Mantenha o fio na chama até que fique incandescente e, em seguida, mova a parte adjacente sem fio do laço levemente através da chama. O fio agora estará esterilizado e a parte sem fio terá qualquer poeira queimada que possa ter caído na mídia durante o procedimento de transferência. Deixe o loop esfriar por alguns segundos no ar antes de tocá-lo em sua cultura ou meio.


Figura 1: Flaming apropriado de um loop. Observe como a alça do laço é segurada apenas pelo polegar e dois primeiros dedos e o laço é inserido na parte mais quente da chama.

3. Pegue o tubo de cultura de caldo de doador com a outra mão, enquanto ainda segura a alça estéril. Com a mão segurando o laço, use o dedo mínimo contra a palma da mão para remover a tampa ou plugue do tubo de cultura, conforme mostrado na Figura 2. Não coloque a tampa ou plugue em sua bancada. Se o tubo for de vidro, passe levemente a borda do tubo através do bico de Bunsen para queimar qualquer poeira aderente e criar um diferencial de temperatura que temporariamente evita que a poeira caia em seu tubo. Agora, insira a alça no caldo sem tocar nas laterais do tubo e, em seguida, remova-a, carregando uma alça cheia de cultura. Passe a parte superior do tubo de cultura através da chama, recoloque a tampa do tubo ou plugue e coloque o tubo novamente em um suporte.

Figura 2: Transferindo uma cultura. (a) Remoção da tampa do tubo durante a manipulação de uma alça (b) Obtenção do inóculo de um tubo de caldo enquanto mantém a esterilidade da tampa (observe a tampa na mão).

4. Pegue o tubo ou placa de destino esterilizado etiquetado. Remova a tampa (se for um tubo de vidro, passe a borda do tubo através da chama),
5. Insira a alça contendo a cultura no tubo de destino do caldo estéril, gire suavemente e remova. Se o destino for uma placa de meio sólido, siga as instruções para listras de isolamento ou para uma placa de propagação encontradas na seção de protocolos do wiki.
6. Recoloque a tampa e coloque o tubo de caldo recém-inoculado na prateleira.
7. Reesterilize o laço antes de colocá-lo no chão, inserindo o laço na chama muito devagar! Fazer isso lentamente permite que qualquer líquido remanescente no ciclo evapore em vez de ferver e evita respingos de células bacterianas vivas por toda a bancada e você.


ISOLAMENTO DE CULTURA PURA

Microorganismos na natureza nunca são encontrados em populações puras. Diferentes tipos de microrganismos mistos estão normalmente presentes no solo, água, alimentos, ar e em várias partes do corpo humano ou animal. Para estudar o papel desempenhado por um microrganismo específico nesses ambientes, é necessário isolar os microrganismos em cultura pura.

CULTURA MISTA: - Uma cultura contém mais de uma espécie de micróbios.

CULTURA PURA: - (Uma cultura de laboratório contendo uma única espécie de organismo). Uma cultura pura é normalmente derivada de uma cultura mista pela transferência de uma amostra para um meio de crescimento novo e estéril, de forma a dispersar as células individuais pela superfície do meio ou diluindo a amostra várias vezes antes de inocular o novo meio.

É extremamente importante manter culturas puras isoladas por longos períodos em uma condição viável.

TÉCNICAS DA PURA CULTURA: - . O isolamento de um tipo de microorganismo de uma mistura de tipos muito diferentes é chamado de técnica de cultura pura.

OS SEGUINTES MÉTODOS SÃO USADOS PARA ISOLAR CULTURA PURA.

MÉTODO DE PLACA STREAK: - O método de placa listrada é o método mais amplamente utilizado para o isolamento de culturas. O princípio deste método é que, por faixas, um gradiente de diluição é estabelecido ao longo da face da placa de Petri, onde as células bacterianas são depositadas na superfície do ágar.

As placas de teste são preparadas espalhando uma pequena quantidade de cultura mista sobre a superfície do meio sólido em uma placa de Petri com uma alça de fio de platina ou nicromo. A amostra é semeada de forma a proporcionar diluições sucessivas. O objetivo do espalhamento é diluir o inóculo (cultura inicial) sucessivamente para que os micróbios se separem.

Uma segunda etapa também pode ser riscada do mesmo laço / agulha sem reinoculação. No início da linha, os micróbios se aglomeram e as colônias se desenvolvem intimamente, mas à medida que a linha continua, as células se separam, pois a agulha contém menos células. Portanto, na última linha, poucas e claramente separadas colônias são desenvolvidas. Transfira as colônias bem isoladas da placa de raia para outra nova placa para isolamento e purificação (subcultura).

MÉTODOS DE DERRAME DE PLACA: - O princípio principal deste método é a diluição dos inóculos em tubos sucessivos contendo meio de ágar liquefeito de modo a permitir uma distribuição completa das células bacterianas no meio.

TÉCNICA DE DILUIÇÃO DE LOOP: -

Neste método, a cultura mista de bactérias é diluída diretamente em tubos de meio de ágar líquido (resfriado) e bem misturada. O meio é mantido em estado líquido a uma temperatura de 45 & # 176 C para permitir uma distribuição completa dos inóculos. Neste método, uma quantidade fixa de inóculos (geralmente 1 ml) de uma amostra é colocada no centro de uma placa de Petri estéril usando uma pipeta estéril. O conteúdo de cada tubo é despejado em placas de Petri separadas e então solidificado. Essas placas são então incubadas para desenvolver colônias bacterianas tanto no meio de ágar (colônias de subsuperfície) quanto no meio (colônias de superfície). Uma série de placas de ágar apresentando diminuição do número de colônias resultante da técnica de diluição em alça.

TÉCNICA DE DILUIÇÃO EM SÉRIE: -

Neste método, os inóculos originais podem ser diluídos com água esterilizada ou solução salina (com pipeta) de forma que a concentração dos micróbios diminua gradualmente.

Um microrganismo que predomina em uma cultura mista pode ser isolado na forma pura por uma série de diluições.

O objetivo dessa diluição é inocular uma série de tubos com uma suspensão microbiana tão diluída que alguns tubos apresentem o crescimento de apenas um micróbio individual.

Por exemplo. Uma cultura contendo 10 ml de meio líquido, contendo 1000 microrganismos. isto é, 100 microrganismos / ml do meio líquido. 1 ml deste meio é retirado e misturado com 9 ml de meio líquido estéril fresco e o meio resultante tem 100 microrganismos em 10 ml ou 10 / ml. mais 1 ml desta suspensão é adicionado a outros 9 ml de meio líquido estéril fresco, cada ml contém agora um único microrganismo. Se este tubo apresentar algum crescimento microbiano, existe uma probabilidade muito elevada de que esse crescimento seja resultado da introdução de um único microrganismo no meio e represente a cultura pura desse microrganismo.

DESVANTAGENS DAS TÉCNICAS DE PLACA DE DERRAMAMENTO:

Os microrganismos ficam presos sob a superfície do meio quando ele se solidifica. Conseqüentemente, as colônias de superfície e de subsuperfície são desenvolvidas e é muito difícil isolar e contar as colônias de subsuperfície.

Este método é tedioso, demorado e requer habilidade.

Os microrganismos são submetidos a choque térmico porque o meio líquido é mantido a uma temperatura de 45 & # 176C.

MÉTODO DA PLACA SPREAD: - O princípio deste método envolve o uso de um espalhador esterilizado com uma superfície lisa de metal ou vidro para aplicar uma pequena quantidade de bactérias suspensas em uma solução sobre uma placa que precisa estar seca e em temperatura ambiente para que o ágar possa absorver as bactérias. mais prontamente.

Na técnica de espalhamento em placa, a cultura misturada não é diluída no meio de cultura. É diluído em uma série de tubos contendo água esterilizada ou solução salina.

Uma amostra é removida de cada tubo de diluição (0,1 ml) e colocada na superfície de uma placa de ágar. A cultura é espalhada usando um espalhador de vidro na superfície da placa de ágar.

As placas são incubadas e as colônias isoladas são observadas após 24 horas e contagem

VANTAGENS DO MÉTODO DA PLACA DE SPREAD :

Ø Neste método, apenas colônias superficiais são formadas.

Ø Este método também é usado para contar os microrganismos presentes nos inóculos.

Ø Os microrganismos não são expostos a altas temperaturas.

MÉTODO DE MICROMANIPULADOR: Um micromanipulador é um dispositivo que é usado para interagir fisicamente com uma amostra sob um microscópio. Normalmente pode consistir em um joystick de entrada, um mecanismo para reduzir a amplitude de movimento e uma seção de saída com os meios de segurar uma micro ferramenta para segurar, injetar, cortar ou manipular o objeto conforme necessário. Micromanipuladores são geralmente usados ​​em conjunto com microscópio

Micromanipulador são dispositivos que podem pegar uma única célula microbiana de uma colônia de cultura mista. Micromanipuladores são usados ​​em conjunto com microscópios para coletar uma única célula bacteriana de preparações de gotas suspensas. A única célula microbiana é sugada suavemente para a micropipeta e transferida para uma grande gota de meio estéril em outra lamínula. O método de micromanipulador torna uma pessoa razoavelmente segura de que a cultura pura vem de uma única célula. O dispositivo, entretanto, deve ser usado com habilidade e precisão

Método do tubo de rolo: - O método do tubo de rolo é usado para o isolamento de anaeróbios rigorosos.

Um tubo de cultura anaeróbico rolhado é usado para isolamento, o qual foi revestido com um meio de ágar pré-reduzido contendo nitrogênio livre de oxigênio.

Quando a rolha é removida, o tubo é mantido anaeróbico, lavando-o continuamente com CO2 livre de oxigênio de uma cânula de gás. A inoculação é feita com uma alça de transferência mantida contra a superfície do ágar enquanto o tubo é girado por um motor. A inoculação começa na parte inferior e puxa o loop gradualmente

Prepare a diluição de dez vezes e adicione 0,1 ml de cultura diluída ao ágar fundido resfriado a 50 & # 176c despejado em tubo de ensaio. Agora incline o tubo e role para que o meio seja formado como uma película fina ao redor da parede do tubo. Incube e conte o número de colônias no dia seguinte


Trabalho Prático de Aprendizagem

Notas baseadas em informações em 'Microbiologia prática básica' © Society for General Microbiology.

Consulte as técnicas assépticas antes de iniciar este ou qualquer outro trabalho prático de microbiologia.

Você pode fazer placas de bactérias ou leveduras. Uma placa de linha envolve a diluição progressiva de um inóculo de bactéria ou levedura sobre a superfície do meio de ágar solidificado em uma placa de Petri. O resultado é que algumas das colônias na placa crescem bem separadas umas das outras. O objetivo do procedimento é obter colônias puras isoladas isoladas. Se mais de uma forma ou cor de colônia nas linhas de listras for evidente, isso indica que uma cultura contém mais de um tipo ou espécie de bactéria ou levedura. Este método é o mais simples dos vários métodos de preparação de uma placa listrada. Ver Nota 1 para alternativas.

Esta técnica é usada para verificar a pureza das culturas que estão sendo mantidas por um longo período de tempo - a amostragem e listras regulares mostrarão qualquer contaminação por outros micróbios. Ele também é usado por profissionais especializados para iniciar novas culturas mantidas, escolhendo uma colônia isolada apropriada de uma espécie identificável com uma alça estéril e cultivando as células em caldo nutriente estéril.

Saúde e segurança e notas técnicas

1 Duas outras abordagens ao fazer uma placa listrada são:

eu levantar a tampa verticalmente (ou seja, ainda diretamente acima da base) a menor quantidade que permitirá o acesso da alça

ii para colocar a tampa na superfície de trabalho, levante a base, inverta-a e inocule a superfície de ágar voltada para cima. Este é o método usado por microbiologistas profissionais e é melhor reservado para alunos mais velhos que trabalham em um laboratório relativamente livre de poeira e correntes de ar.

2 Você pode fotocopiar e cortar um desenho simples de onde as estrias devem estar e fixá-lo temporariamente na placa de ágar como um modelo - tornando mais fácil colocar as estrias no lugar certo.

Procedimento

uma Afrouxe a tampa do frasco que contém o inóculo.

b Segure uma alça de inoculação em sua mão direita.

c Flameje o loop e deixe esfriar.

d Levante o frasco / tubo de ensaio que contém o inóculo com a mão esquerda.

e Remova a tampa / tampão de algodão do frasco / tubo de ensaio com o dedo mínimo da mão direita.

f Flameje o gargalo da garrafa / tubo de ensaio.

g Insira a alça no caldo de cultura e retire. Em todos os momentos, mantenha o loop o mais imóvel possível.

h Flameje o gargalo da garrafa / tubo de ensaio novamente.

eu Recoloque a tampa / tampão de algodão do frasco / tubo de ensaio usando o dedo mínimo da mão direita. Coloque o frasco / tubo de ensaio na bancada (ou em um rack).

j Levante parcialmente a tampa da placa de Petri que contém o meio sólido.

k Segure a alça carregada paralela à superfície do ágar. Espalhe o inóculo para trás e para a frente em uma pequena área do meio (veja a área riscada 'A' na fotografia).

eu Remova o laço e feche a placa de Petri.

m Flameie o loop novamente e deixe esfriar.

n Rode o prato 90 ° no sentido contrário ao dos ponteiros do relógio.

o Com a alça resfriada, risque a placa da área 'A' em toda a superfície do ágar em três ou quatro linhas paralelas (área 'B'). Certifique-se de que uma pequena parte da cultura seja transportada.

p Remova o laço e feche a placa de Petri.

q Flameie o loop novamente e deixe esfriar. Vire o prato 90 ° no sentido anti-horário novamente e risque a partir de 'B' em toda a superfície do ágar em três ou quatro linhas paralelas (área 'C').

r Remova o laço e feche a placa de Petri.

s Flameje o loop novamente e deixe esfriar. Vire o prato 90 ° no sentido anti-horário e passe a alça pela superfície do ágar de 'C' até o centro da placa 'D'.

t Remova o laço e feche a placa de Petri. Flame o loop novamente.

você Tape a placa fechada e incube a placa na posição invertida.

Links da web

Recursos para professores de microbiologia
Society for General Microbiology - fonte de Microbiologia Prática Básica, um excelente manual de técnicas de laboratório e Microbiologia Prática para Escolas Secundárias, uma seleção de práticas experimentadas e testadas usando microrganismos.

Microbiologia online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) é apoiado pela Society for General Microbiology (veja acima) e seus sites incluem mais informações de segurança e um link para pedir conselhos por e-mail.

(Sites acessados ​​em outubro de 2011)

© 2019, Royal Society of Biology, 1 Naoroji Street, London WC1X 0GB Registered Charity No. 277981, Incorporated by Royal Charter


Como é feito o método da placa listrada?

  1. A alça de inoculação deve ser esterilizada no bico de Bunsen simplesmente colocando a alça na chama. Aguarde até que o loop fique vermelho, indicando que já está quente. Deixe esfriar por alguns minutos.
  2. Usando a alça de inoculação, escolha uma colônia isolada da placa de ágar e espalhe no primeiro quadrante da placa de Petri. (4, 5)
  3. Risque suavemente a alça de inoculação usando um movimento de vaivém.
  4. Coloque o laço no fogo e deixe esfriar. Estenda as listras até o segundo quarto da placa de Petri.
  5. Repita a etapa quatro e desta vez estenda a faixa para o terceiro quadrante da placa de Petri.
  6. Repita a etapa quatro e volte para a área que você riscou no terceiro quadrante da placa de petri e, desta vez, estenda a faixa para o quarto quadrante da placa de petri.
  7. Flame o loop. (8, 9 e 10)

Interpretando resultados

A placa listrada deve ser incubada por um total de 24 horas a uma temperatura de 37 graus Celsius. Examine cuidadosamente as colônias cultivadas na placa de Petri. O resultado esperado é que todas as colônias devem ter a mesma aparência geral.

Se você notar que existe mais de um tipo de colônia, então você deve começar a espalhar novamente, mas desta vez em um prato separado para obter uma cultura pura. (4, 5 e 6)


Assista o vídeo: Mecanismos de isolamento reprodutivo (Janeiro 2022).