Em formação

Descobrindo a melhor concentração para o meu extrato vegetal a ser usado como medicamento para diabetes


Estou usando o extrato vegetal de Ajuga parviflora e descobri que ele possui propriedades antidiabéticas por meio do ensaio de inibição da alfa-amilase. Usei várias concentrações de 250 µg / ml (29% de inibição de alfa-amilase), 500 µg / ml (37%), 750 µg / ml (46%) e 1000 µg / ml (63%). Basicamente, a alfa-amilase resulta no aumento do nível de glicose após a ingestão de alimentos. Então eu queria saber como eu poderia descobrir qual a melhor concentração do meu extrato vegetal para ser usado como medicamento.


Você deve tentar determinar a melhor concentração.

Normalmente, existem vários ensaios clínicos, primeiro em animais, depois em humanos para

  1. descobrir a dose eficaz
  2. procure por efeitos colaterais
  3. compare a eficácia do novo medicamento com os medicamentos existentes

Babosa

Aloe é uma planta suculenta amplamente utilizada na medicina alternativa. Existem pelo menos 420 espécies de plantas diferentes de Aloe. Aloe vera refere-se especificamente à planta Aloe barbadensis Miller, que é a forma mais comum usada em produtos à base de Aloe.

Como o Aloe é usado?

Tradicionalmente, o gel transparente da planta Aloe é esfregado na pele como uma pomada para tratar feridas e queimaduras. A parte verde da folha pode ser transformada em suco ou seca e tomada por via oral como laxante. Aloe vera é usado em muitos produtos comerciais em várias formas, incluindo bebidas, concentrados, cápsulas, pós e como aromatizante.

E se eu usar gel de Aloe vera na minha pele, isso me machucará?

Não é provável que a aplicação do gel de Aloe vera na pele cause danos. Embora esses estudos de NTP específicos tenham olhado apenas para a exposição oral ao Aloe vera, outros estudos de NTP examinaram os efeitos do gel na pele e não encontraram uma ligação forte entre o Aloe vera em produtos para a pele, luz solar e o desenvolvimento de câncer de pele. Os resultados desses estudos de pele foram relatados no Relatório Técnico NTP 553 sobre o Estudo de Fotococarcinogênese de Aloe Vera.

Por que as pessoas consumiriam bebidas que contêm Aloe?

Anúncios de produtos afirmam que as bebidas podem ser usadas para limpar o sistema digestivo ou aliviar a constipação.

O que faz o Aloe agir como um laxante?

Um componente orgânico na polpa externa das folhas de Aloe, conhecido como látex, contém antraquinonas. Aloin é um exemplo de uma antraquinona encontrada no látex que pode dar à planta suas qualidades laxantes.

Quanto aloin há em produtos nos EUA que podem ser consumidos pelo público?

Existem poucos dados sobre quais são os níveis de aloin nos produtos de consumo. De acordo com pesquisas publicadas, os níveis de aloína na maioria dos produtos líquidos são inferiores a 1 parte por milhão (ppm), no entanto, os níveis em produtos sólidos ou semissólidos podem ser 10-100 vezes maiores.

Quanto aloin tem em uma bebida típica?

Isso não está claro. A indústria geralmente processa a folha de Aloe vera para fazer um extrato de folha inteira descolorado para remover o aloína. A indústria tem um padrão de limite superior autorregulado de 10 ppm de aloína em produtos ingeridos por via oral, mas não há requisitos de rotulagem para o conteúdo de aloína.

Quais são os efeitos adversos da exposição excessiva ao Aloe em humanos?

Mais pesquisas são necessárias para responder a esta pergunta. Em roedores, causou tumores intestinais. Se você está preocupado, tem um problema de saúde ou está tomando outros medicamentos, ervas ou suplementos, deve falar com seu médico antes de alterar os tratamentos existentes ou iniciar qualquer novo tratamento.

Quão semelhantes são as doses de aloína na água de beber fornecida aos animais com aquelas encontradas nos produtos de Aloe vera?

Isso não está claro, pois não há requisitos de rotulagem para listar o conteúdo de aloin. A concentração de aloína na água que os roedores beberam no estudo do NTP é semelhante à encontrada em alguns produtos de Aloe vera, mas maior do que em outros produtos. O NTP queria testar uma preparação de Aloe que incluísse todos os componentes que podem estar nos produtos no mercado. O estudo NTP usou um extrato de folha inteira de Aloe barbadensis Miller que não passou por filtração de carvão durante o processamento. Muitos produtores comerciais de bebidas de Aloe vera usam filtragem de carvão para reduzir os níveis de aloína em seus produtos.

O Aloe vera é regulamentado?

Aloe vera é um suplemento dietético e não um medicamento regulamentado. Não há garantia de resistência, pureza ou segurança desses produtos. Aloe vera é aprovado pela Food and Drug Administration como um aditivo alimentar para dar sabor.

Babosa

O estudo NTP de dois anos sobre o consumo de extrato de folha inteira não descolorido de Aloe vera encontrou evidências claras de atividade carcinogênica em ratos machos e fêmeas, com base em tumores do intestino grosso.

Pelo que sabemos agora, não há nada que nos leve a acreditar que essas descobertas não sejam relevantes para os humanos.

No entanto, são necessárias mais informações, incluindo como os indivíduos usam diferentes tipos de produtos de Aloe vera, para determinar os riscos potenciais para os humanos.

O que os estudos com roedores NTP significam para os humanos?

Os estudos com ratos NTP são motivo de grande preocupação. Algumas perguntas que precisam ser respondidas antes que sua importância possa ser totalmente avaliada incluem:

  1. Quais produtos estão realmente no mercado?
  2. Quais são os níveis de aloin em um amplo espectro de produtos?
  3. Quais são os padrões de exposição humana?

Não há informações suficientes atualmente disponíveis para saber quanto Aloe vera as pessoas estão consumindo ou por quanto tempo. Com base no que sabemos agora, não há nada que nos leve a acreditar que essa descoberta não seja relevante para os humanos.

Você tem ideia do que pode estar causando os tumores e outros efeitos?

Suspeitamos que pode ser o aloin, mas não sabemos com certeza. Esperamos fazer mais estudos para determinar o que pode estar causando os tumores. Achei que beber produtos de Aloe era bom para mim.

Devo parar de beber Aloe?

Essa é uma decisão que você pode querer fazer com seu médico. Como qualquer decisão pessoal, quanto mais informações você tiver, melhor. Atualmente, os fabricantes desses produtos não são obrigados a rotular a concentração de aloína nos produtos de Aloe vera. Se aloína é a causa dos tumores em ratos, então, de modo geral, quanto menor a concentração de aloína em um produto, menor a possibilidade de causar danos. Tumores se desenvolveram em animais que beberam água contendo 60 ppm de aloin diariamente por quase toda a vida.


Para este projeto de ciência, você precisará desenvolver seu próprio procedimento experimental. Use as informações na guia de resumo como ponto de partida. Se você quiser discutir suas idéias ou precisar de ajuda na solução de problemas, use o fórum Ask An Expert. Nossos especialistas não farão o trabalho para você, mas farão sugestões e oferecerão orientação se você vier a eles com perguntas específicas.

Se você deseja uma ideia de projeto com instruções completas, escolha uma sem um asterisco (*) no final do título.


POTENCIAL ANTI CANCRO DO EXTRATO DE FLOR DE TECOMA STANS

Sobre os autores:
S.Kameshwaran 1 * , V.Suresh 1, M.Mohanraj 2
1 Departamento de Farmacologia,
Fundação de pesquisa médica JKK munirajah e Faculdade de Farmácia,
B.Komarapalayam, Namakkal, Tamilnadu - 638183
2 laboratórios de bioitoxinologia marinha, CAS em biologia marinha, universidade Annamalai,
Chidambaram, Tamilnadu-608502
*[email protected]

RESUMO
Tecoma stans flores têm sido tradicionalmente usadas para muitas doenças, incluindo câncer. No presente estudo, a atividade anticâncer do extrato de flor metanólica de T.stans (METS) foi avaliada usando métodos in vitro e in vivo. METS foi submetido a investigações fitoquímicas qualitativas preliminares usando procedimentos padrão. A atividade antitumoral in vitro de METS foi avaliada pelo método de ensaio MTT usando as linhas celulares Vero e HEP-2. Em seguida, o extrato submetido a na Vivo atividade anticâncer usando modelo de tumor de carcinoma de ascite de Ehrlich (EAC). A atividade foi avaliada Aumento na expectativa de vida, aumento médio no peso corporal, mudanças na ingestão de alimentos, volume do tumor, peso do tumor, contagem de células viáveis, contagem de células não viáveis, PCV, contagem total de células e estudos hematológicos. A potência do extrato foi comparada com o 5-flurouracil padrão (20 mg / kg i.p.). Na atividade anticâncer in vitro, METS exibiu atividade citotóxica significativa contra ambas as linhas celulares, mesmo em concentrações diferentes. A administração oral de METS na dose de 200 e 400 mg / Kg, significativamente (p & lt 0,001), aumentou o tempo de sobrevivência, a contagem de células não viáveis ​​e diminuiu o peso corporal médio e a ingestão de alimentos, a contagem de células viáveis ​​dos camundongos com tumor. Após 14 dias da inoculação, o METS foi capaz de reverter as alterações nos parâmetros hematológicos, proteína e PCV decorrentes da inoculação do tumor. Os resultados indicam que o METS possui atividade antitumoral significativa de maneira dependente da dose.

REFERÊNCIA ID: PHARMATUTOR-ART-1275

INTRODUÇÃO
O câncer, segunda maior causa de morte no mundo depois das doenças cardiovasculares, é um grupo de mais de 100 doenças diferentes, caracterizadas por crescimento celular descontrolado, invasão local de tecidos e metástases à distância 1. O câncer é a causa de mais de seis milhões de mortes a cada ano no mundo. Em 2001, cerca de 1.268.000 novos casos de câncer e 553.400 mortes foram relatados nos Estados Unidos 2. Pode ser tratada com cirurgia, radioterapia, quimioterapia, terapia hormonal e terapia biológica. A quimioterapia ainda é um grande desafio para os pacientes com câncer porque essa droga altamente potente pode ser tóxica e menos de 1% das moléculas da droga injetada podem atingir suas células-alvo, enquanto o restante pode danificar células e tecidos saudáveis, especialmente medula óssea, tecidos epiteliais, retículo. sistema endotelial e gônadas 3 Desde a época medieval, as plantas são fonte de medicamentos para o tratamento de doenças. Independentemente da disponibilidade de uma grande variedade de drogas sintéticas, as plantas continuam - mesmo no século 21 - parte integrante dos cuidados de saúde em diferentes países, especialmente os em desenvolvimento. No final dos anos 90, a OMS afirmou que uma grande porcentagem da população mundial depende de terapias à base de plantas para cobrir as necessidades dos cuidados primários de saúde (OMS, 1999) 4. As áreas de câncer e doenças infecciosas ocupam posição de destaque na utilização de plantas medicinais como fonte de descoberta de medicamentos. Entre as preparações anticâncer e anti-infecciosas aprovadas pelo FDA, as drogas de origem natural têm uma participação de 60% e 75%, respectivamente 5. É importante mencionar o vivo interesse atual na descoberta de drogas naturais para o tratamento e quimioprevenção do câncer 6,7. Um grande número de espécies de plantas é rastreado e bioensaio com essa finalidade em todo o mundo 8.
Tecoma stans(Nome comum: sino amarelo) também conhecido como arbusto de trombeta amarela pertencente à família Bignoniaceae. É uma planta ornamental. É um arbusto ereto, ramificado, pouco peludo ou quase liso com 2 a 4 metros de altura. As folhas são opostas, pinadas ímpares e até 20 centímetros de comprimento com 5 a 7 folíolos. Os folhetos são lanceolados a oblongo-lanceolados, com 6 a 13 centímetros de comprimento, pontiagudos em ambas as extremidades e dentados nas margens. As flores em forma de trombeta são amarelas, levemente perfumadas e nascidas em cachos terminais curtos e densos. O cálice é verde, com 5 a 7 milímetros de comprimento e 5 dentes. A floração pode começar já em abril e continuar no outono. As flores são seguidas por tanpods de 15 centímetros de comprimento, cheios de pequenas sementes aladas como papel 9.

Folhas da T.stans contêm os alcalóides tecomine e tecostamine são potentes agentes hipoglicemiantes quando administrados por via intravenosa. O ácido antranílico é responsável pela atividade antidiabética. As raízes são potentes diuréticos e vermífugos 10. O tecoma não é tóxico porque esta planta é usada na América Latina como remédio para diabetes e, além disso, para alimentação de bovinos e caprinos no México 11. A triagem fitoquímica preliminar do extrato metanólico do extrato da flor de Tecoma stans evidenciou a presença de flavonóides, fenóis, alcalóides, taninos, esteróides, triterpenos, antraquinonas e saponinas etc.
Os flavonóides são um grupo de mais de 4000 compostos polifenólicos que ocorrem naturalmente em alimentos de origem vegetal. Esses compostos possuem uma estrutura comum de fenilbenzopirona (C6-C3-C6) e são categorizados de acordo com o nível de saturação e abertura do anel pirano central, principalmente em flavonas, flavanóis, isoflavonas, flavonóis, flavanonas e flavanonóis 12,13. O peso da evidência epidemiológica de um efeito protetor dos flavonóides contra o câncer é impressionante. Um número crescente de estudos epidemiológicos sugere que a ingestão elevada de flavonóides pode estar correlacionada com uma diminuição do risco de câncer 14. os flavonóides podem inibir vários estágios do processo de carcinogênese, a saber, início, promoção e progressão do tumor. Também em estudos in vivo e in vitro, muitos mecanismos de ação podem estar envolvidos. Estes incluem inativação de carcinógenos, antiproliferação, parada do ciclo celular, indução de apoptose e diferenciação, inibição da angiogênese, antioxidação e reversão da multirresistência ou uma combinação desses mecanismos 15. Com base nessas informações sobre os flavonóides como agentes anticâncer, o presente estudo enfoca a atividade anticâncer (in invitro e in vivo) do extrato metanólico de flores de Tecoma stans.

MATERIAIS E MÉTODOS
Coleta e extração

As flores de Tecoma stans foram coletados no mês de maio em Rasipuram (distrito de Namakkal) Tamil Nadu. A planta foi identificada pelo Dr.G.V.S.Murthy, Diretor Adjunto de Pesquisa Botânica da Índia, Círculo Sul, TNAU Campus, Coimbatore, que autenticou a planta a partir da literatura disponível. As pétalas das flores foram secas à sombra e pulverizadas e 100 g do pó seco foram extraídos com metanol por soxhlet apparatous quente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e temperatura controlada usando evaporador rotativo flash. A triagem fitoquímica do extrato revelou a presença de taninos, flavonóides, fenol, alcalóides, esteróides, triterpenos e saponinas, etc.

Linhas de células tumorais
Vero e Hep-2 (linha de células de carcinoma de laringe humana), As linhas de células foram adquiridas no Amla Research Institute, Trichur. As células EAC foram obtidas sob a cortesia de Amala Cancer Research Center, Trissur, Kerala, Índia. Eles foram mantidos por inoculação intraperitoneal semanal de 106 células / camundongo.

Animais
Ratos albinos suíços machos pesando 150-180g foram usados ​​neste experimento. Eles foram alojados em condições ambientais padrão como temperatura ambiente (25 o C ± 1 o C), umidade relativa (55 ± 5%) e ciclo claro escuro de 12/12 horas. Os animais tiveram livre acesso à dieta de pellets padrão e água ad libitum. Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com as diretrizes do CPCSEA. O comitê de ética animal do instituto deu a aprovação para a realização de experimentos com animais (aprovação nº 1158 / ac / 07 / CPCSEA).

AGORA VOCÊ TAMBÉM PODE PUBLICAR SEU ARTIGO ONLINE.

ENVIE SEU ARTIGO / PROJETO PARA [email protected]

DESCOBRIR MAIS ARTIGOS EM NOSSO BANCO DE DADOS

ATIVIDADE ANTI CANCRO
Atividade anticâncer in vitro
Ensaio de MTT (3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difenilteterazólio) 16. As células foram cultivadas em meio RPMI-1640 a 37ºC sob incubação por 6-7 horas. 5% de CO2 em uma incubadora umedecida. As células foram colhidas, contadas (3 × 104 células / ml) e transferidas para uma placa de 24 poços e incubadas por 24 horas. Antes da adição do composto de teste. Diluições em série de amostras de teste foram preparadas dissolvendo compostos em DMSO, seguido por diluição com meio RPMI-1640 para dar a concentração final de 250, 500, 1000μg / ml. Soluções estoque de amostras foram preparadas. Amostra em 10μl e linhas celulares em 90μl foram incubadas por 72 horas. A solução de MTT a 5mg / ml foi dissolvida em 1ml de solução tampão de fosfato (PBS), e 10μl dele foram adicionados a cada um dos 24 poços. Os poços foram envolvidos em papel alumínio e incubados a 37ºC por 4 horas. A solução em cada poço contendo mídia, MTT e células mortas foram removidas por sucção e 150μl de DMSO foram adicionados a cada poço. Em seguida, as plantas foram agitadas e a densidade óptica registrada em leitor de microplacas (espectrofotômetro) a 595 nm. DMSO como um espaço em branco. Os controles e as amostras foram testados e replicados para cada concentração e replicados três vezes para cada linha celular. Após 24h de incubação das células mononucleares com extratos vegetais, a citotoxicidade nas linhagens de células cancerosas foi avaliada usando o ensaio de MTT. A citotoxicidade foi obtida pela comparação da absorbância entre as amostras e o controle. Os valores foram então usados ​​para calcular iterativamente a concentração de extratos de plantas necessária para causar uma redução de 50% (IC50) de um crescimento (número de células) para cada linhagem de células.

Viabilidade celular (%) = OD média / OD de controle x 100

ATIVIDADE ANTICANCER IN VIVO
Determinação da atividade antitumoral

Os animais foram aclimatados às nossas condições laboratoriais. Eles foram divididos em cinco grupos viz. Controle normal (G1), Animal induzido por câncer (G2), animal induzido por câncer tratado com 20mg / kg de grupo tratado com 5-fluorouracil (G3) 200mg / kg de flores METS (G4) e 400mg / kg de flores METS (G5) de dez cada e usado para o estudo 17. As células EAC foram adquiridas no Amala Cancer Institute, Thrissur, Kerala e injetadas por via intraperitonial (2 × 10 6 células / camundongos) em todos os grupos de animais. No segundo dia os animais de G4 e G5 foram tratados com 200 e 400mg / kg / dia p.o. de METS floresce enquanto G3 com 5-fluorouracil (20 mg / kg. i.p.) e o tratamento foi continuado pelos próximos 14 dias. O G2 não recebeu nenhum tratamento após a inoculação com células EAC. Os ratos foram observados durante os próximos 14 dias quanto ao desenvolvimento de tumor ascítico. No dia 15, vinte e quatro horas da última dose e 18 horas de jejum, 6 animais de cada grupo foram sacrificados por deslocamento cervical para mensuração de parâmetros antitumorais e hematológicos e o restante foi mantido com ração e água ad libitum para verificação do percentual de aumento de vida extensão do tumor hospedeiro. A atividade antitumoral do extrato foi medida em animais EAC em relação aos seguintes parâmetros. Volume do tumor, peso do tumor, volume de células empacotadas (PCV), contagem de células viáveis, contagem de células não viáveis, porcentagem de células viáveis, porcentagem de células não viáveis, aumento na expectativa de vida (ILS), aumento médio no peso corporal, mudanças nos alimentos ingestão 17-18.

Determinação de parâmetros hematológicos
Para detectar a influência das flores METS no estado hematológico de camundongos portadores de EAC, foi feita uma comparação entre cinco grupos (n = 6) de camundongos no 15º dia após a inoculação. Os grupos eram constituídos por (I) ratinhos de controlo normal, (II) ratinhos com tumor, (III) ratinhos com tumor tratados com 5-fluorouracilo (20 mg / kg. I.p.. por 14 dias). (IV) flores METS (200 mg / Kg / dia, p.o. por 14 dias), e (V) camundongos com tumor tratados com flores METS (400 mg / Kg / dia, p.o. por 14 dias). O sangue foi coletado de cada camundongo pelo método do plexo retroorbital e os glóbulos brancos (WBC), glóbulos vermelhos (RBC), hemoglobina e proteína foram determinados 19-21. A preparação de soro do mesmo sangue é usada para avaliar os parâmetros bioquímicos.

ANÁLISE ESTATÍSTICA
Todos os valores foram expressos como média ± SEM. A análise estatística foi realizada com análise de variância (ANOVA) de uma via seguida pelo teste de comparação múltipla de Tukey Kramer. Os valores de P & lt 0,001 foram considerados altamente significativos e & lt0,05 foram considerados significativos quando comparados com o controle.

RESULTADOS
Atividade anticâncer in vitro
A partir do ensaio de MTT, após tratamento com várias concentrações de parâmetros METS Flowers, como porcentagem de viabilidade celular, porcentagem de citotoxicidade foi comparada com células não tratadas (controle). Diminuição da viabilidade celular e aumento de amp na citotoxicidade por METS Flowers foi observada em ambas as linhas celulares de maneira dependente da dose, mas uma diminuição significativa na viabilidade celular (P & lt 0,001) foi observada para 1000 μg / ml 500 μg / ml e 250 μg / ml doses de METS Flowers produziram inibição significativa do crescimento. A atividade inibidora de crescimento de Tecoma stans flores foi mais significativo à medida que a concentração de Flores METS aumenta no caso das linhas celulares Vero e Hep-2. [Tabela 1]

Atividade citotóxica in vitro de METS em linhas celulares VERO e HEP2

VERO CELL LINE

LINHA CELULAR HEP 2

% DE VIABILIDADE CELULAR

% DE CITOTOTOXICIDADE

% DE VIABILIDADE CELULAR

% DE CITOTOTOXICIDADE

Atividade anticâncer in vivo

Parâmetros de crescimento e sobrevivência do tumor
A atividade antitumoral de METS Flowers contra camundongos portadores de tumor EAC foi avaliada pelos parâmetros como volume do tumor, peso do tumor, contagem de células viáveis ​​e não viáveis, tempo médio de sobrevivência e% de aumento da expectativa de vida, aumento médio no peso corporal, mudanças na comida ingestão. O volume do tumor, o peso do tumor e a contagem de células viáveis ​​foram significativamente aumentados (p & lt0,001) e a contagem de células não viáveis, o aumento no peso corporal e a ingestão de alimentos foram significativamente (p & lt0,001) baixos em animais de controle EAC quando comparados com animais de controle normais. Além disso, o tempo médio de sobrevivência aumentou para 31,66 ± 6,02 (% ILS = 75,39) e 26 ± 1,0 (% ILS = 61,9) na administração de Flores METS na dose de 400 mg / kg e 200 mg / kg, respectivamente. Finalmente, a mudança no peso corporal dos animais sugere a propriedade de inibição do crescimento do tumor de T.stans flores. A ingestão de alimentos também diminuiu nos animais controle do tumor quando comparados aos animais controle normais. Todos esses resultados indicam claramente que o extrato tem uma capacidade notável de inibir o crescimento de tumor sólido induzido por células EAC [Tabela-2].

Efeito do METS no tempo médio de sobrevivência (MST), aumento percentual do tempo de vida (% ILS), aumento médio no peso corporal, mudanças na ingestão de alimentos, volume do tumor, peso do tumor, PCV, contagem de células tumorais viáveis ​​e não viáveis ​​em EAC carregando ratos

CONTROLE EAC

5 - FU (20mg / kg)

35.33±5.85***

26±1.0*

31.66±6.02***

84.12**

61.9**

AUMENTO MÉDIO NO CORPO WT (gms)

4.0±0.50*

ALTERAÇÕES NA INGESTÃO DE ALIMENTOS (gms)

48.83±2.32***

34.32±0.41***

41.71±0.78***

VOLUME DO TUMOR (ml)

3.73±0.40***

6.2±0.20***

5.53±0.40***

PESO DO TUMOR

0.63±0.07***

2.32±0.11***

1.20±0.17***

3.16±0.28***

6.33±0.28***

5.5±0.50***

CÉLULAS VIAVEIS

(× 10 6 células / ml)

2.21±0.20***

3.98±0.10***

3.28±0.21***

CÉLULAS NÃO VIÁVEIS (× 10 6 células / ml)

3.89±0.12***

1.91±0.07***

2.74±0.09***

23.12**

41.65**

34.33**

NÃO VIAVEL%

97.25**

47.83**

68.58**

TOTAL DE CÉLULAS

(× 10 6 células / ml)

6.00±0.32***

5.89±0.17***

6.02±0.30***

n = 6 animais em cada grupo, os valores são representados como média ± SEM de seis animais. * P& lt0,05, ** P& lt0.01 e *** P& lt0,001 entre o controle da doença e os grupos tratados. (Analisado pelo teste de comparação múltipla ANOVA Tukey-Kramer)

Parâmetros hematológicos
Parâmetros hematológicos de camundongos com tumor em 15 dias foram encontrados para ser significativamente alterados em comparação com o grupo normal. A contagem total de leucócitos aumentou com a redução do conteúdo de Hb nas hemácias. O número total de RBC mostrou uma mudança modesta. No mesmo intervalo de tempo, o extrato com uma dose de 400 mg / kg e 200 mg / kg restaurou todos os parâmetros hematológicos alterados para quase quase normal [Tabela-3].

TABELA 3 Efeito de METS nos parâmetros hematológicos de camundongos com EAC

PROJETO DE TRATAMENTO

CONTROLE DE TUMOR

RBC(106 células / mm3)

WBC (103 células / mm3)

Contagem Diferencial

Linfócitos

Neutrófilos

n = 6 animais em cada grupo, os valores são representados como média ± SEM de seis animais. * P& lt0,05, ** P& lt0.01 e *** P& lt0,001 entre o controle da doença e os grupos tratados. (Analisado pelo teste de comparação múltipla ANOVA Tukey-Kramer).

Parâmetros bioquímicos
Vários parâmetros bioquímicos, como Tot.Protein, SGPT, SGOT, ALP, LPO, GSH, SOD, valores CAT de METS Na dose de 400 mg / kg foram comparáveis ​​ao medicamento padrão 5-fluorouracil (20 mg / kg. Ip) (Tabela -4). Estudo histopatológico do fígado de cada grupo de animal dado na Fig -2.

TABELA-4: Efeito do METS em parâmetros bioquímicosde camundongos portadores de EAC.

n = 6 animais em cada grupo, os valores são representados como média ± SEM de seis animais. * P& lt0,05, ** P& lt0.01 e *** P& lt0,001 entre o controle da doença e os grupos tratados. (Analisado pelo teste de comparação múltipla ANOVA Tukey-Kramer)

DISCUSSÃO
O tumor de ehrlich foi inicialmente descrito como um adenocarcinoma mamário murino espontâneo. É um carcinoma de crescimento rápido com comportamento muito agressivo e é capaz de crescer em quase todas as linhagens de camundongos. Na forma ascética, tem sido usado como modelo de tumor transplantável para investigar os efeitos antitumorais de várias substâncias 22. Os critérios confiáveis ​​para julgar o valor de qualquer fármaco anticâncer são o prolongamento da inibição do ganho de peso corporal médio e a diminuição de leucócitos 23,24. Os resultados do presente estudo mostraram um efeito anticâncer de METS Flowers contra EAC em camundongos albinos suíços. Foi observado um aumento significativo (p & lt 0,001 e 0,05) de MST e diminuição do ganho no peso corporal médio [Tabela - 1]. Houve um aumento regular e rápido no volume do fluido ascético em camundongos com EAC. O líquido ascítico é a fonte nutricional direta do crescimento tumoral, pois atende às necessidades nutricionais das células tumorais 25. O tratamento com METS Flowers diminuiu o volume do tumor, peso do tumor, PCV do tumor sólido.

A redução na contagem de células viáveis ​​e o aumento da contagem de células não viáveis ​​em direção ao normal no hospedeiro tumoral sugerem efeito antitumoral contra células EAC em camundongos. Neste estudo, METS Flowers aumenta a contagem de células não viáveis ​​em até 68,58% e 47,83% a uma dose de 400mg / kg, 200 mg / kg, respectivamente [Tabela-2], o que sugere que o extrato bruto tem relação direta com células tumorais como estas as células tumorais são absorvidas pelo fármaco anticâncer por absorção direta e este agente anticâncer lise as células por mecanismo citotóxico direto

Anemia e mielossupressão têm sido freqüentemente observadas no carcinoma ascítico (26). Anemia encontrada no carcinoma ascítico principalmente devido à deficiência de ferro, seja por condições hemolíticas ou mielopáticas, que finalmente levam à redução do número de hemácias 27. A análise dos parâmetros hematológicos mostrou efeito tóxico mínimo nos camundongos tratados com METS Flowers após 15 dias do transplante, o METS Flowers foi capaz de reverter as alterações nos parâmetros hematológicos decorrentes da inoculação do tumor. Isso indica o efeito protetor do METS Flowerson no sistema hemopoiético sem induzir mielotoxicidade, os efeitos colaterais mais comuns da quimioterapia contra o câncer [Tabela-3].
A atividade antitumoral do EPG foi comparável à do 5-fluorouracil, que é comumente usado como agente antitumoral ativo em uma vasta série de estudos clínicos e pré-clínicos 28.

Estudos fitoquímicos indicam que a presença de taninos, flavonóides, fenol, alcalóides, esteróides, triterpenos e saponinas etc. Os compostos polifenólicos podem inibir as células cancerosas por enzimas metabolizadoras xenobióticas que alteram a ativação metabólica de carcinógenos potenciais, enquanto alguns flavonóides também podem alterar a produção de hormônios e inibir aromatase para prevenir o desenvolvimento de células cancerosas 29. O mecanismo de ação da atividade anticâncer dos fenólicos pode ser o distúrbio da divisão celular durante a mitose no estágio de telófase. Também foi relatado que os fenólicos reduziram a quantidade de proteína celular e o índice mitótico, e a formação de colônias durante a proliferação celular de células cancerosas 30,31.
Foi finalmente sugerido que as atividades anticâncer in vitro e in vivo do extrato metanólico de flores de Tecoma stans são provavelmente devidas à presença de alcalóides, compostos fenólicos, flavonóides e terpenóides. Novos estudos estão em andamento para caracterizar os princípios ativos e elucidar o mecanismo de ação.


Que ingredientes contém o Mellitox?

Como mencionado anteriormente, Mellitox foi fundado em uma prática vietnamita, que Rob afirma ter feito uma diferença positiva em sua própria cura. Para ser mais específico, Rob supostamente partiu em uma "jornada de cura" que o levou a um vilarejo no Vietnã. Os habitantes compartilharam o efeito positivo de um punhado de plantas, ervas, vitaminas e minerais no diabetes tipo 2. Nos casos em que um diagnóstico foi estabelecido, acredita-se que os ingredientes diminuem gradualmente seu impacto na saúde do indivíduo. Vamos primeiro descobrir os ingredientes que compõem a mistura patenteada e, em seguida, examinar a combinação de suporte também:

Ashwagandha

Ashwagandha é um tipo de erva que há muito é usada na medicina ayurvédica. Em relação às suas propriedades, confia-se que atue como um adaptogen, ou seja, pode ajudar o organismo a responder melhor aos diferentes estressores da vida. Um estudo que analisou especificamente os efeitos da ingestão de ashwagandha na resistência à insulina em ratos concluiu que o ingrediente, de fato, reduziu os marcadores inflamatórios, levando a taxas de sensibilidade à insulina (ou seja, como as células respondem à insulina, quanto mais alto, melhor ) [1].

Rhodiola

Rhodiola é um tipo de planta perene pertencente à família Crassulaceae. É semelhante a ashwagandha no sentido de que também carrega propriedades adaptogênicas. Embora não pareça ter um impacto direto no hormônio insulina, pode ajudar a reduzir os níveis de cortisol para que um equilíbrio dos hormônios possa ser alcançado.

Este último parece ser confirmado em um estudo que analisou explicitamente a associação de Rhodiola e cortisol. Especificamente, os pesquisadores relataram que 576 mg de Rhodiola pode reduzir a exaustão, aumentar o desempenho mental e reduzir a resposta do cortisol ao estresse do despertar em pacientes com síndrome da fadiga. [2] & rdquo

Camomila

A camomila é uma erva muito apreciada por seus efeitos sedativos. Ou seja, muitas vezes é incentivado como um meio de aumentar a qualidade do sono. Dito isso, um estudo que envolveu a ingestão de vários chás de camomila por dia descobriu que os níveis de glicose no sangue, de fato, melhoraram entre os pacientes com diabetes. Foi ainda explicado que tal melhora pode ser devido às suas propriedades antioxidantes, limitando o estresse oxidativo e seu impacto na resistência à insulina [3].

Ácido gama-aminobutírico (GABA)

O ácido gama aminobutírico (GABA) é um tipo de neurotransmissor que visa evitar que sinais específicos se tornem excessivamente excitados. Dado que o Mellitox visa retificar a barreira hematoencefálica, um ingrediente como o GABA é confiável para aliviar a ansiedade ou promover o sono, para citar o mínimo. É importante notar que este componente teve problemas ao tentar atravessar a barreira hematoencefálica, mas vários estudos foram capazes de mostrar o contrário. Por enquanto, os resultados deste achado são mistos e justificam uma investigação mais aprofundada [4].

Erva-cidreira

A erva-cidreira é uma erva milenar que pertence à família das hortelã. Como os ingredientes acima, parece reduzir o estresse e melhorar o sono geral. Uma fonte destacou que ele contém uma fonte rica de uma substância química chamada ácido rosmarínico, que evita a quebra do GABA [5]. Na verdade, ele também ajuda a diminuir os níveis de açúcar no sangue em pessoas com diabetes, a um ponto em que se pode querer monitorar seus níveis para prevenir a hipoglicemia [6] regularmente.

Solidéu

Conhecida botanicamente como Scutellaria, a calota craniana é outra erva da família da hortelã confiável para melhorar diferentes áreas da saúde. Ao fazer algumas pesquisas sobre seus benefícios, um estudo em animais que analisou a eficácia do extrato de calota craniana descobriu que os níveis de colesterol prejudicial caíram entre o grupo que seguiu uma dieta hipercolesterolêmica e tomou o extrato em comparação com o grupo apenas com dieta. Por que os níveis de colesterol entram em cena? Acontece que a flutuação dos níveis de açúcar pode esgotar as gorduras saudáveis, levando a uma série de problemas de saúde indesejáveis ​​[7].

Hawthorn

Hawthorn is a type of berry that has been long known for its rich source of polyphenols and anti-inflammatory properties. A review that summarized several studies regarding the berry&rsquos potential has since noted that it can reduce the risk of developing some cancers and asthma, infections, heart problems, premature skin aging, and type 2 diabetes. Seeing that diabetes is a condition that is also a result of chronic inflammation, hawthorns can be especially useful. Unfortunately, for the time being, only animal studies on hawthorn ingestion and diabetes have been conducted [ 8 ] .

Bacopa Monnieri

Bacopa monnieri is yet another herb that Ayurveda practitioners stand by. Its antioxidant and anti-inflammatory properties are trusted to ease the brain. One study showed that both 300mg and 600mg of bacopa extract could significantly improve cognitive function among the elderly [ 9 ] . To add to that, an article that looked at its antihyperglycemic activity explained that the herb&rsquos component, bacosine, &ldquoproduced a significant decrease in the blood glucose level when compared to with the diabetic control rats&rdquo group. In fact, lost weight was also regained to a certain level (i.e., within normal ranges) [ 10 ] .

Passionflower

Passionflower, native to Southeastern U.S. and Central and South America, is an herb that has been linked to enhanced sleep quality. By now, it should be clear that certain elements of Mellitox aim to ease anxiousness and stress, which might give rise to sleep. Given that the metabolism is linked to blood sugar levels, the former&rsquos reparation processes become crucial. These often take place during one&rsquos sleep. Having said that, a study was able to show that 500mg of passionflower can induce a &ldquosignificant incremental in total sleep time&rdquo in Wistar rats [ 11 ] .

Valerian

Valerian root is popularly considered as a treatment for insomnia. Its ability to bind to GABA is reasoned as having a positive, sedative effect. This means that neurotransmitters are calmed, and consequently, consumers are as well. Sleep is sought-for by people with diabetes, seeing that fluctuating blood sugar levels prevent restfulness altogether [ 12 ] .

L-Theanine

Of all the ingredients listed in Mellitox, an amino acid found in excess in tea leaves called l-theanine is trusted to cross the blood-brain barrier. This is said to improve cognition and healthy changes to specific brain wave activity [ 13 ] . Moreover, a study that investigated L-theanine&rsquos absorption levels concluded that there was a &ldquodecline in insulin secretion and glucose concentration,&rdquo adding that it &ldquocould inhibit the glucose uptake by downregulating the related gene expression in the small intestine of rats. [ 14 ] &rdquo

Oat Straw

Oat straw is derived from the Avena sativa plant. In general, it has been found to reduce inflammation. That said, the same source highlighted that its antioxidants property (i.e., avenanthramides) could improve blood flow in the heart and brain [ 15 ] . The latter is normally negatively related to blood glucose levels. Precisely, excess sugar is said to deplete blood vessels&rsquo elasticity, which in turn might impede blood flow [ 16 ] . In this case, oat straw clearly aims to rectify damages caused.

Mucuna Pruriens

Mucuna pruriens is considered an &ldquoestablished herbal drug&rdquo that has been traditionally used to treat nervous disorders and male infertility. Concerning its anti-diabetic effect, a team of researchers mentioned that mucuna pruriens are typical of interest because of their &ldquoinsulin-mimetic effect[s].&rdquo A relatively outdated study that involved the administration of 500mg of mucuna pruriens per kg was also included. Significant evidence was allegedly found, namely, in the form of a reduction in plasma glucose levels [ 17 ] .

St. John&rsquos Wort

St. John&rsquos Wort is a flowering plant from the family Hypericaceae. Used over a span of hundreds of years, today, it can be found over-the-counter for treating mild and moderate depression, anxiety, and sleep problems [ 18 ] . At the time of writing, some sources affirm that depression and diabetes have a link – whether it is direct or indirect is somewhat complicated. That said, this ingredient also carries some mixed results. An example of this involves one study that was able to show that &ldquoSt. John&rsquos Wort produces persistent glucose intolerance via decreased beta-cell function,&rdquo further explaining that it &ldquomay increase risk of type 2 diabetes in the already at-risk depressed population [ 19 ] .&rdquo

Hop is a plant known for its sedative effects. This is something that has been confirmed across several studies. One particular group of researchers that wanted to precisely understand the effect of hops on rest rhythm was able to find that small doses can make the biggest of differences [ 20 ] . The whole point in including this ingredient appears to rest in recovering sleep, which is often lost with type 2 diabetes.

Griffonia Simplicifolia

Griffonia simplicifolia is a plant that carries an active compound called 5-HTP (i.e., short for 5-hydroxytryptophan). This chemical works primarily in the brain to create serotonin, which can positively impact sleep, appetite, pain, and mood. With the aforementioned in mind, it is clear that this ingredient does not appear to have a direct link to type 2 diabetes [ 21 ] .

  • Vitamin B1 (6mg): Can support people with diabetes.
  • Vitamin B2 (6mg): This might lower the risk of developing type 2 diabetes.
  • Niacin (14mg): Surprisingly, it might trigger blood sugar levels to increase.
  • Vitamin B6 (4mg): Mixed reviews on whether it can increase/ decrease blood sugar.
  • Biotin (150mcg): Early research suggests that it might lower blood sugar when combined with chromium.
  • Pantothenic Acid (8mg): This might be useful for diabetes treatment, but more research is needed to make strong claims.
  • Calcium (13mg): Is trusted to lower the risk of developing incident diabetes.
  • Magnesium (12.5mg): Might regulate blood sugar and reduce insulin resistance.
  • Zinc (12.5mg): This is believed to improve glucose levels among those with diabetes.
  • Potassium (12.5mg): Low levels of potassium have been linked to reduced insulin production, possibly triggering blood sugar levels to rise.

Discussão

Native communities in the Sultanate of Oman utilize a plenty of indigenous medicinal plants since the ancient times as a primary health care. However, there are no proper herbalist documentation or biological studies on the indigenous plants existed in current literature.

More than three-quarters of the active constitutes which are derived from plants presently available in global use to treat human diseases that have been partially discovered through established research steps on folk and ethnomedicinal uses. It is authoritative that ethno botanically based research to find active phytochemicals be inaugurated on a broad scale production [16].

This above data encouraged us to exploit the available natural resources in Oman towards the study on pharmacological and alleviation of different human oxidative stress. All kinds of oxidative stress plays a major part in the pathogenesis of numerous main human chronic diseases, such as cancer, heart diseases, diabetes and Alzheimer’s condition. Also, transferable sicknesses are a vital concern in our present society due to the advent of manifold drug resistant strains of bacteria that cause millions of deaths worldwide. Therefore, the selected medicinal plant was undertaken to screen the bioactivities and phenols and flavonoids contents which were collected from the Southern part of Oman. The plant aerial parts were collected during the month of September, 2018. After collection, the samples necessary process was done in the preparation of the extract. Total of six extracts with increasing polarity were prepared according to the standard protocols mentioned above in the experimental sections.

Medicinal plants are a gift of Allah and they contain a several groups of biologically active constituents, minerals, different types of vitamins and minor percentage of trace elements which is badly needed for human health. All the chemical constituents are a fascinating yet secretive group of several thousands of phytochemicals found in plant sources. Most of the phytochemicals are well known to be biologically active, which may exert a beneficial action on the human body. The mentioned phytochemicals have a wide range of positive action on the human body which include mainly the complex carbohydrates, flavonoids, terpenoids, proteins, several organic acids, alcohols and their corresponding complex, oils, tannins, saponins glycoside, glucosides and so on [17]. In addition, the primary and secondary compounds produced by plants to support their existence and biological effects. These above mentioned phytochemicals are being researched for nutrition and herbal medicine [18]. They have significant antioxidants, antimicrobial, antiviral and inspiration hormones, immune function, various inflammations, detoxification and other cell functions. Most of the natural sources, especially plant sources afford a source of biologically active compounds which are currently used as poisons, drugs or beneficial agents [19].

Total phenol content

The total phenols content assay of the aerial six extracts was performed according to a procedure established by Al-Saeedi et al. [14]. All extracts exhibit some amount of total phenol content. The maximum level of phenols was obtained in the ethyl acetate extract and minimum was in hexane extract and the following hierarchy: ethyl acetate>water>methanol>chloroform>butanol> hexane extract (Table 2). The present phenols content results are unable to compare with other results due to the usability of the literature on the selected plant species. But, there are several reports are available in the literature on the other species belong to this family. The total phenol content of other species also showed the average amount present in the plant extracts reported [20, 21].

Total flavonoids content

Similarly, total flavonoids content of the aerial six extracts of H. gallagheri was performed according to the procedure established by Al-Saeedi et al. [14]. All extracts showed some amount of total flavonoids content. In our experiment, butanol extract has a significant amount of flavonoids compare to other prepared extract. But the minimum amount of flavonoids was obtained in water extract and the following hierarchy: butanol>chloroform>hexane>methanol> ethyl acetate>water extract (Table 3). This result showed that most of the flavonoids were present in the butanol aerial extract. In addition, butanol is polar solvent and all of the flavonoids obtained in the butanol extract are polar in nature. The flavonoids content results are unable to compare with other results due to the usability of the literature on the selected plant species. But, several reports are available in literature on the other species belong to this family. Several authors reported on the other species belonging to the family and it was supported in our results [22, 23].

Evaluation of antioxidant activity

The determination of antioxidant activity of aerial various extracts of H. gallagheri was measured by the DPPH method developed by Alabri et al. [15], with further slight modifications. Almost all the crude extracts showed significant inhibition compared to gallic acid. Among them, the highest inhibition was obtained in ethyl acetate and the lowest was in hexane extract. The antioxidant as a percentage of inhibition is presented in Table 4 and Fig. 4. All crude extract basically reacts with DPPH and form a free radical and finally gradually decrease the colour of DPPH. The present experiment, all the aerial extracts from H. gallagheri were able to decolourize the DPPH colour. However, the ethyl acetate gave us the best results for decolourization that indicates the extract contains the maximum number of antioxidant compounds which can decolorize the colour rapidly of DPPH. We could not find any reports on antioxidant activity of the various polarities extracts of the selected plant species, however, there are several reports available on antioxidant activity screening belongs to this family’s plant species [24,25,26,27,28]. Therefore, we are unable to compare our results to the other reports. However, our experimental data are consistent with the other species belonging to this family.


Métodos

In vitro experimental study was employed to evaluate combined antibacterial effect of essential oils obtained from B. cuspidata, B. ogadensis e T. schimperi against clinical isolated MDR gram negative (E.coli e K. pneumoniae) and MRSA and their reference strains.

Medicinal plants selection criteria

In this study, plant selection was on the basis of knowledge of herbalist lived in Bale zone. Those herbalists were used for treating various skin diseases, urinary tract infection sexual transmitted infection, hypertension, tumorcidal, sexual impotence and others. Dawe Kechen and Dawe Serare are found in Bale zone, south east Ethiopia. They are the most remote area with no infrastructure (transport and power supplies). Until this field work, there is no hospital even one health center with no full functioning the health activity in each district. As a result, the community imposed to use medicinal plants for treatment of various diseases. Por exemplo, V. schimper (Qorsa finchaanii), C. myricoides (Handaraafa) and Z. scabra was used to treat cancer, tumor, urinary tract infection and gonorrhea. Whereas, B. cuspidate (Qoree waraantii), B. ogadensis e B. edulis (Suree Lukkuu) used for treatment of kidney, liver cirrhosis, hepatitis, skin diseases, cancer and diabetes.

Plant collection and preparation

Essential oils obtained from aerial parts of T. schimper, B. cuspidate e B. ogadensis were evaluated for their antibacterial effect on multidrug resistant bacteria. T. schimper was collected from Dawe Kechen. B.cuspidate e B. ogadensis were collected from Dawe Serare. Authentication of each plant sample was carried out in the Department of Biology, Faculty of Natural and Computational Science, Addis Ababa University by Dr. Melaku Wondafrash. Those identified plant samples were deposited at the National Herbarium with voucher number Thymus schimperi (E-25/07), Blepharis cuspidate (E-11/07) and Boswellia ogadensis (E-09/07).

Extraction of essential oils

Health and well grown fresh leaves of each plant was collected and cut into small pieces. Plant materials were washed thoroughly under running tap water. Then, it’s subjected to steam distillation using AMIO-37/04 model for 4 h. Essential oils were extracting from aerial parts of T.schimperi, B. cuspidate e B. ogadensis as guideline described by WHO on quality of herbal medicine. The purified essential oils were stored in brown colored bottle vials at 4 °C until used [9, 11, 26, 27].

Culture media

Nutrient agar, MacConkey, Muller Hinton agar (MHA), Muller Hinton Broth (MHB), blood agar (BA), manitol salt agar (MSA), chocolate agar and biochemical reagents were obtained from Department of Medical Microbiology, Immunology and Parasitology, CHS, AAU and Tikur Anbessa Specialized Hospital (TASH), Bacteriology Unit.

Test organisms

The reference strains of S. aureus (ATCC25923), E.coli (ATCC25922), K. pneumoniae (ATCC700603) were obtained from TASH and Ethiopian Public Health Institution and their multidrug resistant strains isolated from different samples of patient’s attending TASH according to CLSI guideline [26].

Modern antibiotics

Modern antibiotics such as tetracycline (30 μg), ciprofloxacin (5 μg), gentamycin (10 μg), cephalotaxon (30 μg), chloramphenicol (30 μg), cefotaxime (5 μg), ceftazidime (10 μg), ceftriaxone (30 μg), amikacin (30 μg), cefuroxime (5 μg), ceftriaxone (30 μg), cefoxitin (30 μg), cloxacillin (5 μg), augmentin (30 μg) were used for testing MDR bacteria according to CLSI guideline [26].

Screening for multidrug resistant bacteria

Multidrug resistance gram negative and S. aureus were isolated from clinical specimen such as CSF, urine, wound and blood. Triplicate of each MRSA and MDR gram negative bacteria were isolated from clinical specimen. All bacterial cultures were first grown on 5% blood agar plates at 37 °C for 18 to 24 h prior to inoculation onto the MHA. Few colonies (3 to 5) of similar morphology of the respective bacteria were transferred with a sterile inoculating loop to a liquid medium until adequate growth of turbidity with McFarland of 0.5. Then the bacterial suspension was streaked on MHA plates using a sterile swab in such a way as to ensure thorough coverage of the plates and a uniform thick lawn of growth following incubation. The susceptibilities of clinical isolates were tested by using the MHA contains a range of antimicrobial agents. Dilutions of overnight broth cultures were inoculated onto antibiotic containing plates to yield final inoculums of approximately 10 6 CFU per spot according to CLSI for MRSA e E.coli e K. pneumoniae [26, 28].

Screening for gram negative

Selected multidrug resistant gram negative such as K. pneumoniae e E. coli were screened for their resistant for more than two different classes of antibiotics following disk diffusion method as CLSI guideline and WHO recommendation [26].

Screening for methicillin resistance Staphylococcus aureus

In this study, cefoxitin was used as marker of mecA /mecC mediated by methicillin resistant S. aureus and drug of choice for disk diffusion method as recommended by CLSI guideline [26]. This strain was selected based on antibiotic profile mentioned (Table 1).

Determination of MIC and MBC values

After preliminary screening of essential oils, those revealed potent antimicrobial effect were further tested to determine MIC and MBC for MDR gram negative bacteria (K. pneumoniae e E. coli) and MRSA. It was determined by MHB broth micro-dilution method. Each 96-well micro-titer plate was liquated with 50 μL of MHB 10 th well (sterility control) was added with 100 μL of MHB. And the 9 th well (growth control) was added with MHB with 5% DMSO. 50 μL of essential oils initially dissolved in 5% DMSO was added into the first well. A serial 2-fold dilution was performed by transferring 50 μL of the suspension to the subsequent wells up till the 8 th well this procedure was performed by modifying Wiegand protocol. 0.5 McFarland broth inoculum was diluted in the ratio of 1:100 and added into 1st-8 th well in achieving the final inoculums size at 5 × 10 5 CFU per ml [27].

Bacterial cell viability and MIC values were determined by observing the turbidity. The lowest concentrations of essential oils with clear suspension were considered as the MIC values. The lowest concentrations of essential oils in the post-incubation suspensions which did not harbor any bacterial growth upon spotting on MHA after overnight incubation at 37 °C were considered as the MBC values. Test was performed in triplicates alongside antibiotics ciprofloxacin (5 μg) for gram negative and cefoxitin (30 μg) for MRSA as positive control respectively [5, 9, 26, 27].

Fractional inhibitory concentration index

In vitro drug interaction was determined by the checkerboard method as described elsewhere and the results were analyzed with the FIC index. Growth control wells containing medium were included in each plate. Each test was performed in triplicate. The concentration of antibiotics needed to inhibit growth was recorded. The following formula was used to calculate FIC: MIC of drug in combination FIC/ MIC of drug alone = The FIC index (∑FIC) calculated as the sum of each FIC, was interpreted as follows: synergy is defined as a FIC index of ≤0.5. Antagonism is defined as a FIC index of ≥2. An indifferent/additive effect is defined as a FIC index of 0.5 < X < 2 or a micro dilution decrease of 1 dilution in the MIC of one or the other drug or no change in the MIC of either of the drugs [24].

Statistical analysis

Statistical data were reading values of inhibition zones (in diameter) and concentration values (MIC &MBC) analyzed using SPSS, version 21 according to CLSI. Each experiment values are expressed as mean ± S.D. Statistical significance was determined by student’s t-test. Values with p < 0.05 were considered significant.


KeenMind ®

Finding focus within the frenzy of daily life can be challenging at times.

KeenMind contains a naturally sourced active ingredient that&rsquos clinically proven to support memory, concentration and learning function. Not only does it provide calm, clear focus, but evidence shows it can reduce nervous tension and mild anxiety too. 1-4

KeenMind is the result of over 50 years of research and development.* We take care to use the same specific extract (CDRI 08) that's been proven in clinical studies to help improve cognitive health. 1-5 This exclusive formula is manufactured in Switzerland using quality ingredients that follow a series of strict control practices to help deliver a consistent medicine each time. It&rsquos this same medicine that is tested in clinical trials and is used worldwide.

As part of the Flordis cognitive range, KeenMind is backed by extensive research, making it an integrative medicine you can count on. Simple.

Always read the label. Follow the directions for use. If symptoms persist, talk to your health professional.


In cell studies, seaweed extract outperforms remdesivir in blocking COVID-19 virus

In a test of antiviral effectiveness against the virus that causes COVID-19, an extract from edible seaweeds substantially outperformed remdesivir, the current standard antiviral used to combat the disease. Heparin, a common blood thinner, and a heparin variant stripped of its anticoagulant properties, performed on par with remdesivir in inhibiting SARS-CoV-2 infection in mammalian cells.

Published online today in Cell Discovery, the research is the latest example of a decoy strategy researchers from the Center for Biotechnology and Interdisciplinary Studies (CBIS) at Rensselear Polytechnic Institute are developing against viruses like the novel coronavirus that spawned the current global health crisis.

The spike protein on the surface of SARS-CoV-2 latches onto the ACE-2 receptor, a molecule on the surface of human cells. Once secured, the virus inserts its own genetic material into the cell, hijacking the cellular machinery to produce replica viruses. But the virus could just as easily be persuaded to lock onto a decoy molecule that offers a similar fit. The neutralized virus would be trapped and eventually degrade naturally.

Previous research has shown this decoy technique works in trapping other viruses, including dengue, Zika, and influenza A.

"We're learning how to block viral infection, and that is knowledge we are going to need if we want to rapidly confront pandemics," said Jonathan Dordick, the lead researcher and a professor of chemical and biological engineering at Rensselaer Polytechnic Institute. "The reality is that we don't have great antivirals. To protect ourselves against future pandemics, we are going to need an arsenal of approaches that we can quickly adapt to emerging viruses."

o Cell Discovery paper tests antiviral activity in three variants of heparin (heparin, trisulfated heparin, and a non-anticoagulant low molecular weight heparin) and two fucoidans (RPI-27 and RPI-28) extracted from seaweed. All five compounds are long chains of sugar molecules known as sulfated polysaccharides, a structural conformation that the results of a binding study published earlier this month in Antiviral Research suggested as an effective decoy.

The researchers performed a dose response study known as an EC50 -- shorthand for the effective concentration of the compound that inhibits 50% of viral infectivity -- with each of the five compounds on mammalian cells. For the results of an EC50, which are given in a molar concentration, a lower value signals a more potent compound.

RPI-27 yielded an EC50 value of approximately 83 nanomolar, while a similar previously published and independent in vitro test of remdesivir on the same mammalian cells yielded an EC50 of 770 nanomolar. Heparin yielded an EC50 of 2.1 micromolar, or about one-third as active as remdesivir, and a non-anticoagulant analog of heparin yielded an EC50 of 5.0 micromolar, about one-fifth as active as remdesivir.

A separate test found no cellular toxicity in any of the compounds, even at the highest concentrations tested.

"What interests us is a new way of getting at infection," said Robert Linhardt, a Rensselaer professor of chemistry and chemical biology who is collaborating with Dordick to develop the decoy strategy. "The current thinking is that the COVID-19 infection starts in the nose, and either of these substances could be the basis for a nasal spray. If you could simply treat the infection early, or even treat before you have the infection, you would have a way of blocking it before it enters the body."

Dordick added that compounds from seaweed "could serve as a basis for an oral delivery approach to address potential gastrointestinal infection."

In studying SARS-CoV-2 sequencing data, Dordick and Linhardt recognized several motifs on the structure of the spike protein that promised a fit compatible with heparin, a result borne out in the binding study. The spike protein is heavily encrusted in glycans, an adaptation that protects it from human enzymes which could degrade it, and prepares it to bind with a specific receptor on the cell surface.

"It's a very complicated mechanism that we quite frankly don't know all the details about, but we're getting more information," said Dordick. "One thing that's become clear with this study is that the larger the molecule, the better the fit. The more successful compounds are the larger sulfated polysaccharides that offer a greater number of sites on the molecules to trap the virus."

Molecular modeling based on the binding study revealed sites on the spike protein where the heparin was able to interact, raising the prospects for similar sulfated polysaccharides.

"This exciting research by Professors Dordick and Linhardt is among several ongoing research efforts at CBIS, as well as elsewhere at Rensselaer, to tackle the challenges of the COVID-19 pandemic through novel therapeutic approaches and the repurposing of existing drugs," said CBIS Director Deepak Vashishth.

"Sulfated polysaccharides effectively inhibit SARS-CoV-2 in vitro" was published in Cell Discovery with the support of the National Research Foundation of Korea. At Rensselaer, Dordick and Linhardt were joined in the research by Paul S. Kwon, Seok-Joon Kwon, Weihua Jin, Fuming Zhang, and Keith Fraser, and by researchers at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology in Cheongju, Republic of Korea, and Zhejiang University of Technology in Hangzhou, China.


Referências

Perlman S, Netland J (2009) Coronaviruses post-SARS: update on replication and pathogenesis. Nat Rev Microbiol 7:439–450

Sawicki SG, Sawicki DL, Siddell SG (2007) A contemporary view of coronavirus transcription. J Virol 81:20–29

Wijegoonawardane PK, Cowley JA, Phan T, Hodgson RA, Nielsen L, Kiatpathomchai W, Walker PJ (2008) Genetic diversity in the yellow head nidovirus complex. Virology 380:213–225

Brian DA, Baric RS (2005) Coronavirus genome structure and replication. Curr Top Microbiol Immunol 287:1–30

Ziebuhr J, Snijder EJ, Gorbalenya AE (2000) Virus-encoded proteinases and proteolytic processing in the Nidovirales. J Gen Virol 81:853–879

Lai MM, Cavanagh D (1997) The molecular biology of coronaviruses. Adv Virus Res 48:1–100

Barcena M, Oostergetel GT, Bartelink W, Faas FG, Verkleij A, Rottier PJ, Koster AJ, Bosch BJ (2009) Cryo-electron tomography of mouse hepatitis virus: insights into the structure of the coronavirion. Proc Natl Acad Sci USA 106:582–587

Davies HA, Macnaughton MR (1979) Comparison of the morphology of three coronaviruses. Arch Virol 59:25–33

de Haan CA, Rottier PJ (2005) Molecular interactions in the assembly of coronaviruses. Adv Virus Res 64:165–230

Masters PS (2006) The molecular biology of coronaviruses. Adv Virus Res 66:193–292

de Haan CA, van Genne L, Stoop JN, Volders H, Rottier PJ (2003) Coronaviruses as vectors: position dependence of foreign gene expression. J Virol 77:11312–11323

Chang CK, Sue SC, Yu TH, Hsieh CM, Tsai CK, Chiang YC, Lee SJ, Hsiao HH, Wu WJ, Chang WL, Lin CH, Huang TH (2006) Modular organization of SARS coronavirus nucleocapsid protein. J Biomed Sci 13:59–72

Weiss SR, Navas-Martin S (2005) Coronavirus pathogenesis and the emerging pathogen severe acute respiratory syndrome coronavirus. Microbiol Mol Biol Rev 69:635–664

Garbino J, Crespo S, Aubert JD, Rochat T, Ninet B, Deffernez C, Wunderli W, Pache JC, Soccal PM, Kaiser L (2006) A prospective hospital-based study of the clinical impact of non-severe acute respiratory syndrome (Non-SARS)-related human coronavirus infection. Clin Infect Dis 43:1009–1015

Drosten C, Gunther S, Preiser W, van der Werf S, Brodt HR, Becker S, Rabenau H, Panning M, Kolesnikova L, Fouchier RA, Berger A, Burguiere AM, Cinatl J, Eickmann M, Escriou N, Grywna K, Kramme S, Manuguerra JC, Muller S, Rickerts V, Sturmer M, Vieth S, Klenk HD, Osterhaus AD, Schmitz H, Doerr HW (2003) Identification of a novel coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome. N Engl J Med 348:1967–1976

Liang G, Chen Q, Xu J, Liu Y, Lim W, Peiris JS, Anderson LJ, Ruan L, Li H, Kan B, Di B, Cheng P, Chan KH, Erdman DD, Gu S, Yan X, Liang W, Zhou D, Haynes L, Duan S, Zhang X, Zheng H, Gao Y, Tong S, Li D, Fang L, Qin P, Xu W (2004) Laboratory diagnosis of four recent sporadic cases of community-acquired SARS, Guangdong Province. China. Emerg Infect Dis 10:1774–1781

Zaki AM, van Boheemen S, Bestebroer TM, Osterhaus AD, Fouchier RA (2012) Isolation of a novel coronavirus from a man with pneumonia in Saudi Arabia. N Engl J Med 367:1814–1820

Hurst KR, Ye R, Goebel SJ, Jayaraman P, Masters PS (2010) An interaction between the nucleocapsid protein and a component of the replicase-transcriptase complex is crucial for the infectivity of coronavirus genomic RNA. J Virol 84:10276–10288

Gong G, Waris G, Tanveer R, Siddiqui A (2001) Human hepatitis C virus NS5A protein alters intracellular calcium levels, induces oxidative stress, and activates STAT-3 and NF-kappa B. Proc Natl Acad Sci USA 98:9599–9604

Irurzun A, Arroyo J, Alvarez A, Carrasco L (1995) Enhanced intracellular calcium concentration during poliovirus infection. J Virol 69:5142–5146

Gkika D, Prevarskaya N (2009) Molecular mechanisms of TRP regulation in tumor growth and metastasis. Biochim Biophys Acta 1793:953–958

Santoni G, Farfariello V (2011) TRP channels and cancer: new targets for diagnosis and chemotherapy. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 11:54–67

Clapham DE (2003) TRP channels as cellular sensors. Nature 426:517–524

Amantini C, Mosca M, Nabissi M, Lucciarini R, Caprodossi S, Arcella A, Giangaspero F, Santoni G (2007) Capsaicin-induced apoptosis of glioma cells is mediated by TRPV1 vanilloid receptor and requires p38 MAPK activation. J Neurochem 102:977–990

Duncan LM, Deeds J, Hunter J, Shao J, Holmgren LM, Woolf EA, Tepper RI, Shyjan AW (1998) Down-regulation of the novel gene melastatin correlates with potential for melanoma metastasis. Cancer Res 58:1515–1520

Pleschka S, Stein M, Schoop R, Hudson JB (2009) Anti-viral properties and mode of action of standardized Echinacea purpurea extract against highly pathogenic avian influenza virus (H5N1, H7N7) and swine-origin H1N1 (S-OIV). Virol J. 6:197

Zhu H, Zhang Y, Ye G, Li Z, Zhou P, Huang C (2009) In vivo and in vitro antiviral activities of calycosin-7-O-beta-D-glucopyranoside against coxsackie virus B3. Biol Pharm Bull 32:68–73

Reddy KK, Grossman L, Rogers GS (2011) Common complementary and alternative therapies with potential use in dermatologic surgery: risks and benefits. J Am Acad Dermatol 68:e127–135

Uzel A, Guvensen A, Cetin E (2004) Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oils of Anthemis xylopoda O. Schwarz from Turkey. J Ethnopharmacol 95:151–154

Rustaiyana A, Masoudib S, Ezatpourb L, Danaiib E, Taherkhanib M, Aghajanic Z (2011) Composition of the Essential Oils of Anthemis Hyalina DC., Achillea Nobilis L. and Cichorium intybus L. Three Asteraceae Herbs Growing Wild in Iran. Journal of Essential Oil Bearing Plants. 14:472–480

Ademosun AO, Oboh G (2013) Anticholinesterase and antioxidative properties of water-extractable phytochemicals from some citrus peels. J Basic Clin Physiol Pharmacol 2:1–6

Dhiman A, Nanda A, Ahmad S, Narasimhan B (2011) In vitro antimicrobial activity of methanolic leaf extract of Psidium guajava L. J Pharm Bioallied Sci. 3:226–229

Kumar P, Mishra S, Malik A, Satya S (2011) Insecticidal evaluation of essential oils of Citrus sinensis L. (Myrtales: Myrtaceae) against housefly, Musca domestica L. (Diptera: Muscidae). Parasitol Res 110:1929–1936

Carvalho OV, Botelho CV, Ferreira CG, Ferreira HC, Santos MR, Diaz MA, Oliveira TT, Soares-Martins JA, Almeida MR, Silva Junior A (2013) In vitro inhibition of canine distemper virus by flavonoids and phenolic acids: implications of structural differences for antiviral design. Res Vet Sci 95:717–724

Su X, D’Souza DH (2013) Naturally occurring flavonoids against human norovirus surrogates. Food Environ Virol. 5:97–102

Ait Mbarek L, Ait Mouse H, Elabbadi N, Bensalah M, Gamouh A, Aboufatima R, Benharref A, Chait A, Kamal M, Dalal A, Zyad A (2007) Anti-tumor properties of blackseed (Nigella sativa L.) extracts. Braz J Med Biol Res 40:839–847

Bakathir HA, Abbas NA (2012) Detection of the antibacterial effect of Nigella sativa ground seeds with water. Afr J Tradit Complement Altern Med 8:159–164

Salem ML, Hossain MS (2000) Protective effect of black seed oil from Nigella sativa against murine cytomegalovirus infection. Int J Immunopharmacol 22:729–740

Ghosheh OA, Houdi AA, Crooks PA (1999) High performance liquid chromatographic analysis of the pharmacologically active quinones and related compounds in the oil of the black seed (Nigella sativa L.). J Pharm Biomed Anal 19:757–762

Hosseinzadeh H, Parvardeh S (2004) Anticonvulsant effects of thymoquinone, the major constituent of Nigella sativa seeds, in mice. Phytomedicine 11:56–64

Khan N, Sharma S, Sultana S (2003) Nigella sativa (black cumin) ameliorates potassium bromate-induced early events of carcinogenesis: diminution of oxidative stress. Hum Exp Toxicol 22:193–203

Verheije MH, Raaben M, Mari M, Te Lintelo EG, Reggiori F, van Kuppeveld FJ, Rottier PJ, de Haan CA (2008) Mouse hepatitis coronavirus RNA replication depends on GBF1-mediated ARF1 activation. PLoS Pathog 4:e1000088

Ulasli M, Verheije MH, de Haan CA, Reggiori F (2010) Qualitative and quantitative ultrastructural analysis of the membrane rearrangements induced by coronavirus. Cell Microbiol 12:844–861

Verheije MH, Wurdinger T, van Beusechem VW, de Haan CA, Gerritsen WR, Rottier PJ (2006) Redirecting coronavirus to a nonnative receptor through a virus-encoded targeting adapter. J Virol 80:1250–1260

Yoshikawa T, Hill T, Li K, Peters CJ, Tseng CT (2009) Severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus-induced lung epithelial cytokines exacerbate SARS pathogenesis by modulating intrinsic functions of monocyte-derived macrophages and dendritic cells. J Virol 83:3039–3048


Assista o vídeo: As cenas marcantes do fime O menino do Pijama Listrado (Janeiro 2022).